2020版高考生物总复习考点加强课6教案.pdfVIP

学必求其心得，业必贵于专精 考点加强课 6 1.限制酶的选择原则 (1）根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶， 以便将目的基因 “切出 ， 如图甲可选择 Pst Ⅰ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，以防破坏目的基因 ,如 图甲不能选择 SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的 限制酶切割目的基因和质粒， 如图甲也可选择用 Pst Ⅰ和 EcoR Ⅰ两 种限制酶 (但要确保质粒上也有这两种酶的切点， 而且这种切点不致 于完全破坏“标记基因 ）。 （2）根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致 ,以确保具有相同 的黏性末端。 - 1 - 学必求其心得，业必贵于专精 ②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不 要破坏这些结构，应至少含有一个完好的标记基因，如图乙中限制 酶 pst Ⅰ因其会破坏标记基因而不宜选择。 ③所选限制酶切点不应位于复制原点处以防破坏复制原点 ,如果所 选酶的切点不止一个，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失 的片段含复制起点区 ,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自 主复制，故不能选择，如 Xba Ⅰ. ④所选限制酶 ,其切点应位于启动子与终止子之间 ,如图乙中 HindⅢ Eco Nde Bam 会破坏启动子， R Ⅰ会破坏终止子 ,而 Ⅰ、 H Ⅰ切出的切 口可让目的基因嵌入启动子与终止子之间 . (3）参加 Ti 质粒的 T －DNA 片段选择限制酶 若质粒上标出 T －DNA 片段，则所选限制酶切点应位于 T －DNA 片段中，从而有利于将目的基因嵌入到 T －DNA 片段上——因为 Ti 质粒的 T －DNA 片段最易转移至受体细胞并且整合到受体细胞染 色体 DNA 上，如用两种限制酶 Xba Ⅰ和Sac Ⅰ（两种酶切出的黏性 末端不同）切割某 DNA, 获得含目的基因的片段。若利用该片段构 建基因表达载体，则下图中甲、乙、丁， Ti 质粒均不宜选择，而丙 Ti 质粒宜选取。 （分析如下) - 2 - 学必求其心得，业必贵于专精 2。目的基因的检测与鉴定 (1）界定“标记基因”与“ DNA分子杂交技术”在目的基因检测中 的作用： ①载体上标记基因的标记原理 载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入 的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的 载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能 够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素 就可以只保留转入载体的受体细胞， 倘若在选择培养基中不能存活， 则表明无质粒转入，当