实验一、油镜的使用、细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察.ppt

微生物学实验;实 验 要 求;实验报告;实验一、油镜的使用、细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察;显微镜油镜的使用;油镜头的识别和重要参数;油镜物镜的工作原理;油镜的使用方法和注意事项;细菌的制片与染色;染 料;涂片;革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。 ;G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。;1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌。 2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红 、蒸馏水、香柏油。 3、器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。;（1）涂片 （2）晾干 （3）固定 （4）结晶紫染色：加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1min；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。 （5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。;（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色15—20s至流出液无色，立即水洗。 （7）复染：滴加复红复染1min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。 （8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。 （9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色结果。;革兰氏染色法; 革兰氏阴性杆菌;实验内容;1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。;2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 3.选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。;绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的形态图并说明染色结果。 思考题：你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结果可信？;谢谢！