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植物组织培养实验指导 植物组织培养实验指导 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE18 植物组织培养实验指导 PAGE 实验一 培养器皿的清洗与环境的消毒及培养基母液的配制 实验二 植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌 实验三 番茄子叶愈伤组织引诱培养阿 实验四 马铃薯茎段的扩繁培养 实验五 海棠叶片的离体培养 实验六 胡萝卜离体根的培养 实验七 组织培养物的继代培养 实验八 马铃薯脱毒与组培快繁 实验九 沙棘组织培养实验方案设计及实行 实验一 培养器皿的清洗与环境的消毒及培养基母液的配制 常用组织培养的玻璃容器及接种用的玻璃器皿如锥形瓶、 培养皿、试管、配置培养基用 的试剂瓶、烧杯等以及金属的镊子、剪刀、接种铲等，用前一定经过清洗，有的还要消毒。 一器皿的清洗方法 1.一般玻璃器皿，特别是第一次使用的新的玻璃器皿，第一用清水充足浸泡后用碱水刷 洗，而后用清水充足除掉碱液，再用无离子水或蒸馏水洗刷洁净后烘干或晾干，待用。 检查玻璃器皿能否洗漱洁净的标准是： 洗后的玻璃器皿沾水后， 充满于整个玻璃表面并 形成完好的水膜，而不会有不平均的水珠出现。 当玻璃器皿十分肮脏，带有不一样的污渍时，则需要特别的清洗液浸泡 4-12小时，而后再 用清水漂洗洁净， 较常用的是铬酸洗液， 它是用重铬酸钾加入浓硫酸配制而成， 其腐化性极 强，对衣物、皮肤等均十分有害，一般尽量防止使用。目前生产有各种合成的化学清洗剂，可消除各种污物，使用方便，是实验室内常用的。 2.金属器具在第一次使用前必需先用四氯化碳或乙醚等有机溶剂将其表面的防锈油擦洗洁净，用布擦干方可使用，每次使用后需用水冲洗并保持干燥。 二器皿及环境的消毒方法 器皿的消毒方法分为： 1.物理方法 又可细分为： （1）干热消毒法（Dryheatsterilization）：合用于玻璃器皿、金属和一些不怕高温的物 品，如培养皿、锥形瓶、各种试剂瓶、刀、剪、镊子等。一般在 150℃烘箱内烤2-3小时，在 消毒灭菌前将所要消毒的物件包装于固定容器或耐热的包装资料内 （如饭盒、培养皿灭菌筒、 铝箔纸等），防备在使用前的再次污染。 （2）湿热消毒法（Wetheatsterilization）：不可以用干热消毒的物件， 如配置好的培养基、 易燃的棉花、工作服、口罩等，要使用高压灭菌锅，经过水蒸气压达到灭菌消毒的目的，常 用气压为15磅或2，温度为121-124℃，灭菌20分钟即可达到杀灭细菌、 消毒的目的。 3）超滤消毒法（Ultrafiltratesterilization）：不耐热易在高温下分解破坏的药品如某些酶类，某些拥有生物活性的物质，如椰乳、抗菌素等，高热常使之无效，常用超滤膜或微 孔滤膜过滤，将细菌等污染源除掉后方可使用，常用 μm孔径的或μm和μm孔径 合用，可将最小的细菌除掉，一般细菌的大小为 1μm左右。 4）紫外光灯消毒法（Ultravioletirradiation）：因消毒成效较弱，要较长时间照耀方 可达到消毒成效，所以只作协助方法，如一个××2的小接种间需照耀2-3小时。 2.化学消毒方法（ Chemicalsterilizationmethods） 常用于桌面、台面、房间的消毒，如用70%的酒精或异丙醇擦抹工作台面，或用新洁尔灭（一种表面活性杀菌剂）喷洒消毒，或用丙二醇（或甲醛及高锰酸钾）熏蒸房间等。 实验二 培养基母液的配制 植物在自然状态下生长时，拥有完好的营养体，是属于自养型的，好多营养物质能够自制，对外界营养条件的要求比较简单，而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不一样，属于异养型，要求的营养条件十分复杂，所以在人工合成培养基的构成和制备上一定全面考虑，知足供给。 一、实验目的 配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。当需要连续和大批配制培养基时，假如每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，所以需要将大批元素、微量元素、铁盐、有 机物质、激素类分别配制成适合的浓缩液。要求掌握植物组织培养培养基母液的配制方法。 二、实验资料 仪器 1 冰箱、电子天平（ ） 容量瓶:1000ml,500ml、250ml、100ml、25ml 广口储液瓶：500ml、250ml、50ml、25ml 烧杯：1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺 标签纸、胶水、记号笔 药品 50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸（HCl）的配制：取浓盐酸 ，加入蒸馏 水1000ml，即为1N的HCl)、1NNaOH(1N氢氧化钠（或氢氧化钾）的配制：称40gNaOH（或氢氧化钾）加入蒸馏水1000ml，即为1N的NaOH(1N的KOH) 几种常用的培养基所需的大批元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏 水 三、实验步骤 依照培