PCR实验方法 模板模板.docxVIP

PAGE PAGE 1 PCR实验方法 常规试验器具与材料 移液器：1 ml 、200μl、20μl、10μl、2μl；吸头及吸头盒：lml、200μl、20μl；匀浆管：5m1、2ml、10ml; EP管：1.5rnl、0.2m1、100μl；试剂瓶：2个l00rn1的棕色试剂瓶（广口、带盖）、1个125rnl的白色试剂瓶（放无水乙醇）；量筒：50ml、 250m1、500m1；容量瓶：250ml、500m1、1000m1；试管架：5rnl、1.5rnl、20μl；盐水瓶：250m1、500m1各2个备用（一个装无水乙醇，另一个装DEPC水）；铝制饭盒：4-5个；大瓷缸：2个；锡箔纸：一卷；卷纸：2卷；三角烧瓶：带盖，稍大。试验器具的处理与预备塑料制品：包括枪头、EP管、匀浆管等。先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中枪头需要吸管吸进DEPC水后，打入盛DEPC水瓷缸中，过夜24h，然后捞出，尽量除去里面的水，放入吸头盒内高压灭菌，再烤干备用，试验前再高压灭菌一次（EP管）。玻璃制品：泡酸过夜，冲洗整洁，小包锡纸180℃烤6h后备用（洗净后先泡1‰DEPC水过夜，再烤干）。匀浆器：包括剪刀、镊子等，先洗净后再高压，180℃烤6h（不需要泡DEPC水）。试剂配制DEPC水：吸出1ml放在999m1双蒸水中，配成1‰ DEPC水，放在1000m1容量瓶中，转子旋转4-6h后静置过夜备用。75％乙醇：用无水乙醇+ DEPC水配制，然后放-20℃保存（其中DEPC水需先高压）。异丙醇和氯仿：均应放入棕色瓶中。电泳缓冲液：Tris, 54g;硼酸，27.5g; 0.5mol/L EDTA, 20m1、pH8. 0 ;蒸馏水定容至l000ml。5×TBE（储藏液）：将5×TBE稀释10倍成0. 5×TBE，就可以在电泳时用法（即工作液），如取50ml储藏液＋450ml水→500m1工作缓冲液。琼脂糖凝胶的配制（1. 0%) : 1.摊琼脂糖+l00m]电泳缓冲液，微波炉中加热30秒至沸腾，融化的琼脂糖冷却至60℃时，加入l0mg/ml溴化乙啶2.5μl，充分混匀，将温热的凝胶倒入已置好梳子的胶模中，在室温下放置30-45 min后，举行电泳。