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黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 6 文2：黄芪注射液对内皮细胞损伤的保护效应 7 1 材料与方法 9 3 讨论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 文1：黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 Activating Effect of Astragalus Injection on Estrogen Receptor Abstract:ObjectiveTo establish the Gal4DBD-ER or ERLBD report system to study the effect of Astragalus Injection on report system was generated by amplifying the ligand binding domain(LBD ) with Pfu polymerase and subcloning the product into the eukaryotic expression vector pCMVBD. This system was employed to study the relatiohip between Astragalus Injection and E. Cell activity were detected by reporter system using ER-LBD is established. Astragalus Injection can not improve cell activity but can activate E mechanisms of Astragalus Injection may be related to its effect of activating E. Gene report system can be used to study the mechanisms of Chinese traditional medicine. Key words:Astragalus Injection； Gene Report system； Estrogen receptor； HeLa cell； Ligand binding domain 雌激素受体（Estrogen receptor, ER）是一个核转录因子, 属甾体激素受体家族成员，调控基因表达。ER在1967 年被首次发现［1］， 20 多年来, 它作为内分泌 治疗 的预测因子被广泛应用。1996 年 ERα首次从大鼠中克隆［2］，其后人和小鼠也相继发现 ERβ的表达［3，4］。ERα和 ERβ的结构、功能存在差异, 在乳腺癌的发生 发展 中发挥不同作用［5］ 。因而研究药物对雌激素受体的作用，将有利于我们认识药物的作用机理。黄芪主要有补气的作用,在临床上主要治疗以气虚为主证的疾病，在处方中多以君药出现,具有补中益气、补气升阳、益卫固表的作用。为了进一步探讨其作用机理，本研究采用哺乳动物细胞杂交技术研究黄芪注射液对雌激素受体配体结合域的作用，探讨黄芪对雌激素受体的部分作用。 1 材料与方法 材料Hela 细胞由 中国 科学 院广州生物医药与健康研究院裴端卿研究员赠送；DMEM无血清、无酚红培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素购自 Hyclone公司；Lipofactemine2000购自 Invitrogen公司；SteadyGlo荧光检测试剂盒购自 Promega公司；细胞培养板均购自 Corning Costar公司；MTT购自 Molecular公司； 黄芪注射液(上海禾丰药业) PCR 扩增 hERa-LBDcDNA 　　根据 gene bank报道的 E序列（M12674和NM001437），设计 hERa-LBD和 hERb-LBD cDNA 序列的引物,在5’端引入一个 BamH Ⅰ的酶切位点,在 hERa-LBD的3’端引入一个 Eco R Ⅰ的酶切位点， 在 hERb-LBD的3’端引入一个 Hind Ⅲ的酶切位点，引物序列如下。上游5’GCGGATCCGGAGGGAGAATGTTGAAAC3’下游　5’GCGAATTCTCAGACTGTGGCAGGGAAAC3’；Human ERβLBD引物序列：上游5’GCGGATCCGGCAAGGCCAAGAGAAGTG3’下游5’　GCAAGCTTTCACTGAGACTGT