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80℃冰冻保存血小板参数变化分析医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：80℃冰冻保存血小板参数变化分析医学 1 1　材料与方法 2 2　结果 3 3　讨论 3 文2：川崎病患儿血小板参数变化的研究临床医学 5 1 资料与方法 6 2 结果 7 3 讨论 7 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 80℃冰冻保存血小板参数变化分析医学 文1：80℃冰冻保存血小板参数变化分析医学 随着输血医学的不断发展，临床输用血小板需求量日趋增加。我国临床用血小板快速增长和无偿献血制度的实施，血小板的供需矛盾日趋突出，迫切地需要延长血小板的保存期限。为此，我们用国际普遍使用的生物冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)对人工分离浓缩血小板进行深低温(-80℃)保存,并对解冻后的血小板进行了血小板参数的检测,以期为进一步冰冻血小板的研究提供理论依据和实验数据，也为下一步改进血小板批量冰冻保存技术、提高冰冻血小板质量打下基础。此技术条件可用于长期储备血小板资源，有希望广泛应用于临床。 1　材料与方法 血小板来源 采集12名健康志愿者外周血，年龄21-26岁，男女各6人，符合我国献血体检标准,在献血前1d内没有饮含酒精类饮料,2周内未服用过阿司匹林及其它抗血小板及抗凝血的任何相关药物,未检测到出凝血性疾病,血细胞比容≥，外周血Plt150×109/L;将所采集的10ml/人(份)全血共12份,抗凝剂枸橼酸钠(ACD）与全血比为1∶9,置于室温(20℃左右)进行样本处理。将上述的采血离心管在天平上调至平衡（每次离心均需要配平）两侧对称放入离心机中，经反复试验比较,最佳离心条件为离心力400g能提高血小板数量。即500转／min离心时间为11分钟轻轻取上层黄色清亮液体即制备出新鲜富含血小板血浆(FPRP) 血小板保存方法 取一半新鲜的PRP进行血小板参数测定，剩下的一半在洁净的环境中采用严格的无菌技术缓慢加入生物冷冻保护剂DMSO到冰冻管里至终浓度为(±)%。然后用湿棉布包冰冻管置-80℃冰箱保存,每冰冻管产品留样量4～5mL冻存，冰冻管应拧紧管盖密封保存。1个月后，取出冰冻制品在恒温水浴箱里（温度37-40℃）快速解冻，轻轻摇动至融化，应避免在常温下放置过久。 主要实验试剂及仪器 （1）-80℃冰箱（Forma，美国):(2)XE-2100型自动血液检测仪(日本)(3)干燥PH试纸（购于昆明丰科公司):(4)二甲基亚砜（购于天津化学试剂有限公司） 血小板的相关参数的检测 分别对冰冻前后的PRP进行测试：（1）取在涡流混匀器充分混匀后于自动血细胞检测仪测定血小板浓度（Plt）、血小板压积（PCT）、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)及大血小板比例（P-LCR）。(2)干燥PH试纸对PRP进行PH值测定，结果精确到。 统计学分析 各组资料统计分析采用配对资料的t检验，P为差异有显著性。所有资料均统计软件包进行统计分析。 2　结果 新鲜血小板和-80℃冰冻保存1个月血小板PLT、PCT、MPV、PDW、P-LCR及PH值经配对t检验（P＞），差异无显著性（结果见表1） 表1-80℃冰冻对正常健康人血小板参数的影响（x-±s） 我们的研究结果表明,富含血小板血浆经5%DMSO保存1个月后的血小板Plt、MPV、PDW、PCT、P-LCR和pH在-80℃冰箱保存1个月基本稳定,与新鲜血小板的差异无显著性(P)；从血小板浓度Plt、MPV、PCT、及PH来看,其冰冻前后有些变化，其值有变大也有变小的但总体变化程度不大，血小板体外回收率(RR)较高，（回收率均值(RR)=冰冻后血小板数÷冰冻前血小板数×100%)。其结果还是令人满意的。我们发现血小板计数（Plt）部分标本冰冻后浓度值升高，一般来说，由于冰冻过程对血小板的破坏，Plt必然下降。然而我们实验中出现升高其原因可能为①实验误差②检测时，标本在涡流均匀器上未充分混匀。 3　讨论 DMSO对生物细胞的保护作用原理主要在于[1]:小分子DMSO易透过细胞膜进入细胞内,增加细胞内溶质溶度,抑制细胞内冰晶形成,有利于细胞内外溶液转变为玻璃化状态,从而使细胞内外的分子运动、生化反应和细胞的生物钟接近停止,使血小板的功能和活性长期得以保持,且由于冰晶被抑制,也减少了细胞内外溶质的浓缩对细胞造成的损伤。同时,相对于/kg体重的安全剂量,终浓度为5%的DMSO经体内稀释对人体是安全的[2]。血小板形态学的改变直接关系到冻融后血小板的功能,但形态学改变与血小板功能间的关系尚待进一步研究[3]。据报道，冷冻保存一个月的血小板在超微结构上仍然维持了较好的形态,在外形上尽