当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响.docVIP

当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞组织化学变化的影响 6 1 材料与方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响 文1：当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响 目前虽然对缺血或缺血再灌注损伤的确切机制还不十分清楚,但已经知道损伤的临床结局主要就是细胞死亡。细胞死亡有两种形式:一种是坏死,另一种是凋亡。凋亡(apoptosis) 是细胞在基因调控下的主动性死亡,不引起炎症反应。持续缺血和缺血再灌注时心肌组织都可发生细胞凋亡。已经证实,人类心肌梗死除细胞坏死外,细胞凋亡也参与了梗死的病理过程,细胞凋亡不仅影响梗死面积,而且促成心脏结构的重构,心肌梗死的早期和晚期均存在凋亡现象。当归为伞形科植物当归Angelicasinenis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛,性温，能补血和血,调经止痛,润燥滑肠。有 文献 报道［1］，当归对冠心病患者有平衡和抑制血小板聚集的作用，因而能明显改善胸痛、胸闷等临床症状和心电图缺血性STT 的变化, 是治疗冠心病的有效药物［2］。但当归对缺血再灌注损伤心肌细胞结构的影响，目前国内外未见报道。本研究采用组织化学方法，探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。 1 材料与方法 11 动物模型制备及分组健康雄性SD大鼠（SPF级）30只,体重250～300g 左右，由武汉大学医学院动物试验中心提供。腹腔注射戊巴比妥钠 mg·(100 g)-1 ,麻醉动物后行气管切开接微型呼吸机人工呼吸（呼吸频率60次·min-1 ,潮气量2ml·(100g)-1,微型呼吸机由第二军医大学生产）,沿胸骨左缘第4 肋骨开胸在左心室、右心室与左心房交界处结扎/ 开放左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型。将动物随机分成3组(每组n=15):假手术组(Ⅰ组) ,丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎；缺血再灌注组( Ⅱ组) ,缺血再灌注前5min 腹腔注射生理盐水 ml·(100 g)；当归治疗组( Ⅲ组),缺血再灌注前5min 腹腔注射当归注射液 ml·(100g)-1 。每组5只动物缺血30min再灌注40min ,10只动物缺血30min 再灌注120min。在缺血再灌注开始前, 经舌静脉注射伊文氏蓝, 缺血40min后心尖无蓝色且呈乌红部分为缺血区,再灌注120min 后心肌经TTC处理后心尖为白色部分为梗死区。 12 主要试剂　25%当归注射液(武汉大学中南 医院 制药厂,批号为970118) 13 标本制作及观察① 取新鲜组织冰冻切片；② 切片入下液作用5～30min M乳酸钠 6ml %乳酸脱氢酶水溶液 2ml 磷酸缓冲液 10ml 蒸馏水 6ml③ 生理盐水稍洗；④ 10%甲醛盐水固定10min；⑤ 15%酒精稍洗1min；⑥ 生理盐水稍洗；⑦ 甘油明胶封片。 14 图像分析采用HPLAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对酶活性表达进行定量分析,每张切片随机选取5个高倍镜视野(×400),测定乳酸脱氢酶(LDH)每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积, 计算 阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 15 统计学处理用软件对各组乳酸脱氢酶(LDH)反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和ＳＮＫ(ｑ)检验,检验水准α为。 2 结果 21 光镜观察假手术组可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，但可见部分胞浆溶解；缺血再灌注损伤组见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，胞浆溶解呈空泡或网状，细胞界限模糊，可见心肌细胞断裂；当归 治疗 组可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，细胞核呈椭圆形位于中央，胞浆内可见平行排列的肌原纤维，细胞轮廓清晰。 22 组织化学观察乳酸脱氢酶(LDH)活性 当归治疗组心肌细胞中乳酸脱氢酶(LDH)反应物呈颗粒状,均匀分布于肌膜下或胞浆内, 颗粒呈深紫色, 表示酶活性很强；假手术组肌酶反应物呈浅紫色细小颗粒状，可见少量的紫色颗粒，分布较稀疏，表示酶活性较弱；缺血再灌注损伤组乳酸脱氢酶(LDH)反应物极弱，几乎未见酶活性表达，表示无酶活性表达。经单因素方差分析,各组间的差异有显著性意义(P)，见表1。经SNK(q)检验, 当归治疗组与假手术组和缺血再灌注损伤组之间乳酸