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端粒酶活性检测对急性髓细胞白血病的临床意义 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：端粒酶活性检测对急性髓细胞白血病的临床意义 1 1 资料和方法 2 2 结果 3 文2：端粒酶活性检测方法的研究进展 5 1 基本原理 6 2 基本技术方法 6 3 扩增片断的检测 7 4 质量控制 9 5 端粒酶活性的半定量检测 10 5 小结 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 端粒酶活性检测对急性髓细胞白血病的临床意义 文1：端粒酶活性检测对急性髓细胞白血病的临床意义 ［ABSTRACT］ObjectiveTo study the expression of telomerase activity in patients with acute myelocytic leukemia （AML） and its clinical significance. MethodsAML patients （ n =74）， benign hematologic patients， and non-hematologic patients with normal bone marrow as controls， were included in this study. Modified TRAP-silver staining and Yalien analyzing software were used to analyze the corresponding data. ResultsExpression of telomerase of the controls was negative or low. For the AML pa-tients， the telomerase activity increased significantly at the initial stage （ F=，q=，P ）， then decreased after com-plete remission （ q=， P ） and increased again at relapse （ q=，P ）. High level of telomerase activity was as-sociated with poor prognosis. ConclusionActivation of telomerase is closely related with the occurrence and development of acute myelocytic leukemia， which could be used as a molecular marker for evaluation of malignant clonal proliferation. ［KEY WORDS］telomerase; leukemia; polymerase chain reaction 为了解端粒酶在急性髓细胞白血病（AML）中的表达情况及其临床意义，本文采用改良TRAP-银染法检测了74例AML病人骨髓单个核细胞端粒酶活性，同时对部分病例进行了动态观察，探讨端粒酶活性与AML的关系。 1 资料和方法 一般资料 AML病人74例，分为初诊组（37例，其中M1 亚型5例，M2 亚型10例，M3 亚型9例，M4 亚型6例，M5 亚型7例）、治疗组（15例）、完全缓解组（14例）和复发组（8例）。将未经过任何处理的初诊病人列为初诊组，将已行化疗但尚未达到完全缓解的病人列为治疗组，将化疗后处于完全缓解持续期的病人列为完全缓解组，将复发病人列为复发组。另取20例良性血液病及16例非血液病病人作为对 照，其中缺铁性贫血（IDA）10例，巨幼细胞贫血（MA）6例，特发性血小板减少性紫癜（ITP）4例。所有病人诊断均符合文献［1］诊断标准，非血液病病人均经骨髓细胞形态学检查排除血液病。 方法 端粒酶提取 参考文献［2］方法，常规提取端粒酶，置-20 ℃保存。 反应 参考文献［2］的方法并略加改进，50 μL反应体系含:20 mmol/L tris-HCl， mmol/L MgCl 2 ，63 mmol/L KCl， g/L Tween 20，1 mmol/L EGTA，50 μmol/L dNTPs， μg的TS引物，体积分数牛血清清蛋白， 2 μL 端粒酶提取液， μg的CX引物，2 U的Taq DNA聚合酶。30 ℃孵育30 min后，94 ℃变性 30 s， 55 ℃退火 30 s ，72 ℃延伸30 s，3