中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响.docVIP

中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响 1 1材料和方法 2 文2：白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响 5 1 材料与方法 6 2 结 果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响 文1：中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响 中药具有十分重要的抗肿瘤作用，中药诱导肿瘤细胞凋亡也已成为近年来国内外研究的热点. 王四旺等［1-2］研制的安迪 (andi injection，Adi) 注射剂中的主要成分蟾酥，具有解毒、消肿、醒神、开窍、强心和止痛等作用，其化学成分含有蟾毒灵(bufalin，BL)，是蟾酥中的活性成分. 田昕等［3］的研究表明, BL是一种有效的肿瘤细胞分化诱导剂，具有显著的抑制肿瘤生长的作用. 本研究通过实验观察Adi 对体外培养的人白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响，为寻找到新的更有效的抗肿瘤药提供依据. 1材料和方法 材料 Adi（生产批号：，由第四军医大学药物研究所提供），实验前用生理盐水溶解， μm 滤膜过滤除菌后使其终浓度为1 mg/mL，4℃保存，测pH 值为. 二甲基亚砜，四甲基偶氮唑盐(MTT)（美国Sigma 公司）；RPMI1640（GIBCO公司）；小牛血清（杭州四季青生物工程公司）；K562细胞株（第四军医大学实验动物中心提供） 方法 细胞培养 将K562细胞悬浮培养在RPMI1640培养液中(含10 ml/L 加热灭活胎牛血清，1 mmol/L谷氨酰胺，1 mmol/L丙酮酸钠,青霉素、链霉素各10 ×105 U /L) ,培养条件为37℃，50 mL/L CO2饱和湿度，培养基为含10 ml/L小牛血清的RPMI1640，在37℃，50 mL/L CO2条件下培养，1～2 d传代1次，实验前24 h半量换液，用锥虫蓝拒染法鉴定细胞活性在以上. 法检测 K562细胞的活力采用 文献 ［4］的方法检测细胞活力，实验时调整细胞数为1×105/ mL，在培养板上接种处于对数生长期的K562细胞，每孔加细胞悬液200 μL. Adi各处理组每孔加入Adi，终浓度分别为，，，，，和 μg/mL；对照组每孔加入等体积生理盐水，每组均设3个复孔. 将培养板放至37℃，50 mL/L CO2温箱培养36 h，加入MTT 20 μL溶液，继续培养4 h后，离心，弃上清， 加入二甲基亚砜150 μL，微型混合器振荡，使结晶完全溶解，酶联检测仪在波长490 nm处测定每孔的吸光度(A)值. 实验重复3次. 检测细胞凋亡率 K562细胞经， μg/mL Adi 处理并培养36 h，收集细胞(每组至少5×105个细胞)，参照文献［5］的方法采用Annexin VFITC及PI染色后上机操作，以未染色细胞将机器调零，以Annexin VFITC单染管和PI单染管作基准参照，选取散点图作直观显示. 细胞的形态学观察 μg/mL Adi 处理组和对照组K562细胞培养36 h后, 1000 min离心10 min，收集细胞. 用无血清培养液洗涤后再次1000 min离心10 min，沉淀用 mL/L戊二醛固定2 h，1 mL/L锇酸固定 h，乙醇梯度脱水，Epon812树脂包埋，超薄切片机切片，醋酸铀和柠檬酸铅双重染色，JEM2000EX透射电镜下观察. 统计学处理： 采用SPSS 软件进行统计学分析，数据以x±s表示，统计学推断采用单因素方差分析，多重比较采用LSDt检验, P为差异有统计学意义. 2结果 法检测 K562细胞活性随着Adi 浓度的增高和作用时间的延长, K562细胞的存活数下降，在作用24 h后细胞基本上存活，处理36 h后细胞多数凋亡，但48 h后不同剂量Adi处理组细胞基本都已死亡， 提示Adi 引起K562细胞凋亡最佳时间为36 h. 对照组的A值（±）与 μg/mL Adi 处理组的A值（±）的差异具有统计学意义（P），大于 μg/mL Adi 处理组A值（±）与 μg/mL Adi 处理组A值（±）的差异无统计学意义（P）. 因此Adi引起K562细胞凋亡的最小浓度为 μg/mL，最大浓度为 μg/mL. 细胞凋亡率 K562细胞给药36 h流式细胞仪分析结果表明，细胞呈现出明显亚二倍体凋亡峰，且细胞凋亡及凋亡后死亡数量随着给药量的增加而增加. K562细胞在对照组以及 μg/mL和 μg/mL不同浓度的Adi作用下，凋亡细胞所