呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响临床医学.docVIP

呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 4 文2：桂利嗪对兴奋毒致痴呆大鼠模型海马单胺类神经递质的影响临床医学 5 1材料与方法 5 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响临床医学 文1：呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响临床医学 研究表明，老年痴呆患者都有脑底动脉硬化、海马区额叶老年斑及神经元纤维缠结的病理变化。中枢meynert基底核神经元缺失伴胆碱能神经元功能障碍，海马区胆碱乙酰转移酶活性降低，可出现不同程度的脑萎缩。因此，中枢胆碱能神经功能障碍与痴呆程度密切相关。为进一步阐明呆聪液 治疗 老年痴呆的作用机制，本文在研究呆聪液对老龄鼠痴呆模型脑M受体及免疫功能影响的基础上〔1〕，探讨呆聪液对老龄鼠痴呆模型脑M受体基因及β淀粉样蛋白(Aβ)受体基因表达的影响。 1 材料与方法 动物 选用22月龄SD大鼠50只，体重250～300 g，雌雄兼用，由山东大学医学院动物试验中心提供。 方法 药物、试剂与仪器 呆聪液主要为人参、生地、知母、黄芪等组成，按中药水提液的制备工艺加工制成，每毫升含生药1 g，由潍坊医学院附属 医院 药剂科配制加工而成;海人酸由潍坊医学院生理教研室李秀艳教授馈赠;3%戊巴比妥钠、乙醚、75%酒精、3%戊二醛、1%锇酸等。江湾Ⅱ型立体定位仪，PCR仪(美国)，凝胶成像分析系统(美国FOTODYNE公司)，电泳仪(美国) 模型制备 将SD大鼠先用3%戊巴比妥钠腹腔内麻醉，然后固定于江湾Ⅱ型立体定位仪上，经消毒后正中矢状切口，按照 文献 〔2〕方法大鼠脑图谱于前颅前2 mm中线旁开 mm处用自制打孔钻打开颅骨一小孔，固定移动装置，垂直进入微型注射针头7～8 mm(即相当于基底核区)，轻轻注入1 μg海人酸(1 μg/μl)，静留针1～2 min后，缓慢移动装置退针，先用石蜡粉溶化后封住颅骨开口，再在封口上撒适量青霉素和链霉素粉剂后缝合皮肤。 给药方法 将造模后的大鼠随机分为痴呆模型组、呆聪液低剂量组(5 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)、高剂量组(20 g/kg)，每组10只，同时设正常对照组。每日呆聪液各剂量组灌胃相应剂量呆聪液，痴呆模型组和正常对照组用生理盐水(10 ml/kg)灌胃，1个月后取脑标本。 检测指标 参照Trizol试剂说明书方法提取大鼠脑细胞总RNA，紫外分光光度法测定总RNA浓度，A260 nm/A280 nm为～，提取总RNA于-70℃保存。引物的设计与合成：β淀粉样前体蛋白(βAPP) mRNA，βactin 通过Http:获得cDNA序列，采用Primer 5引物设计软件，获得PCR引物，引物由上海生工生物工程有限公司合成。βAPP上游引物：(5′3′)AATCCTGCAGTACTGCCAAG,下游引物：(5′3′)TGGCAACAGTACTGCCAAG;βactin上游引物：(5′3′)CAACTTTACCTTGGCCACTACC，下游引物：(5′3′)TACGACTGCAAACACTCTACACC，产物150 bp。RTPCR：用TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) 。取适量总RNA稀释至160 μg/ml，65℃变性3 min后，配置反转录反应液：MgCl2 2 μl，10×RT Buffer 1 μl，RnaseFree dH2O μl，dNTP Mixture 1 μl，Rnase Inhibitor μl，AMV Revee Tracriptase μl，Random9 me μl，RNA 1 μl。30℃反应10 min，42℃反应30 min，99℃反应5 min，5℃反应5 min;PCR反应液组成：5×PCR Buffer 10 μl，灭菌蒸馏水 μl，TaKaRa Ex TaQTMHS μl，上游特异性PCR引物 μl，下游特异性PCR引物 μl，反转录反应液10 μl，总体积为50 μl， PCR反应条件：94℃变性2 min后，βAPP的PCR循环条件：94℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸1 min;βactin的PCR循环条件为94℃变性30 s，55℃ 退火30 s，72℃延伸1 min，完成35个循环后，取PCR产物8 μl在%的琼脂糖凝胶上电泳，5 V，45 min，用自动成像仪(美国FOTO