HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白.docVIP

HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白 1 EcoRⅠ 3 SaLⅠ 3 文2：食管癌放射治疗的相关基因及其蛋白表达的研究进展 6 1抑癌基因p53 7 2早期生长反应基因_1(Egr_1) 7 3原癌基因c_erbB_2 8 4核因子kappaB(NF_κB) 9 5环氧化酶_2(COX_2) 10 6表皮生长因子受体(EGFR) 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白 文1：HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白 Abstract: Objective To observe the intracellular expression and the colocation of HT036 with P311 in human embryo kidney cell The encoding sequence of HT036 was amplified and cloned into the eukaryotic expression plasmid pEGFP cotruction was verified by sequencing and then cotrafected into HEK293 with pDsRed expression products were visualized and analyzed by confocal The vector was successfully confocal microscope scanning showed that the fluorescence fusion protei mainly distributed in cytoplasm and there was colocation between the two This study further confirmes the issue that HT036 and P311 may interact with each other in vitro and play role in hypertrophic scar formation. Key words:trauma repair;protein;gene;fibroblast;scar 创伤修复过程中,由于全身和局部因素的影响，常可导致以细胞外基质过度沉积为特征的增生性瘢痕。它是一类特发于人类的增生性疾病，由于发病机制的多样性和理想动物模型的缺乏，至今仍是创伤修复领域研究的难点和热点。纤维化相关蛋白(P311)基因是本研究小组利用基因芯片技术从早期增生性瘢痕组织中筛选出的显著高表达差异基因[1]，研究发现P311基因参与神经元损伤修复和成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程[2，3]。为了进一步探讨P311基因在创伤修复过程中,尤其是增生性瘢痕发生 发展 中的作用机制及可能存在的上下游调控模式，我们利用酵母双杂交系统筛选了人肝cDNA文库，得到了其中能与P311相互作用的HT036蛋白[4]。HT036为一未知功能蛋白，国内外鲜有 文献 报道。人胚肾293细胞作为最常用的工具细胞，具有表达稳定和易转染特性。本实验通过构建带绿色荧光的HT036融合表达载体，与前期构建的带红色荧光的P311融合表达载体共转染人胚肾293细胞，验证HT036与P311之间的相互作用。 材料与方法 1 主要材料和试剂 HEK293细胞、含HT036编码基因重组载体pACT2HT036、大肠杆菌菌株DH5、含绿色和红色pEGFPN2和pDsRedN1真核表达载体(本室保存)。P311红色荧光融合蛋白表达载体(pDsRedp311)(本室袁顺宗博士构建并保存)。凝胶回收试剂盒(Vgene产品);质粒提取试剂盒(Omega产品);限制性核酸内切酶EcoRⅠ和SalⅠ 、T4DNA连接酶、PCR反应试剂盒(大连宝生物公司);DMEM和小牛血清(Gibco公司);脂质体Lipofetamine 2000(Invitrogen公司);多聚赖氨酸(Sigma公司);其它常规化学试剂为国产分析纯以上产品。 2 方法 引物 根据HT036序列和pEGFPN2载体酶切位点设计引物，在每条引物的5’端引入相应的限制性酶切位点及保护性碱基。引物由上海鼎安生物公司合成，引物序列如下： 上游引物：5’GCGAATTCATGGGGCTGGGGGCCGTC