X连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达临床医学.docVIP

X连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：X连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：凋亡抑制蛋白XIAP与肿瘤多药耐药临床医学 5 1　XIAP的结构、表达及调节 6 2　XIAP的抗凋亡途径 7 3　XIAP与肿瘤多药耐药的关系 8 4　通过抑制XIAP逆转肿瘤多药耐药 9 5　结语 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 X连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达临床医学 文1：X连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达临床医学 X连锁凋亡抑制蛋白(Xlinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)是最有效力的caspase抑制物之一，可通过多种途径介导细胞凋亡，近年来发现XIAP蛋白在多种肿瘤中高表达,与肿瘤的分化程度及预后有关，已成为肿瘤基因 治疗 的新靶点和研究热点〔1，2〕。为此，本实验采用RTPCR法检测子宫颈癌组织和慢性子宫颈炎组织中XIAPmRNA表达情况，以探讨XIAP基因在子宫颈癌发生发展中的作用。 1 材料与方法 标本来源 标本来自2006年3月～2007年11月桂林医学院附属 医院 妇产科门诊，资料收集均取得患者同意，标本大小约为 cm× cm× cm。43例子宫颈癌组织均未行化疗或放疗，包括子宫颈癌G1级11例、G2级23例、G3级9例。临床分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期7例，Ⅲ期16例，Ⅳ期14例。有淋巴转移的13例，无淋巴转移的30例。年龄30～61(平均48)岁，其中50岁以上19例，50岁以下24例。另外取慢性子宫颈炎组织15例作为对照。所有标本均经HE染色证实诊断。标本获取后立即放置到液氮容器内暂时保存，之后转移到-80℃低温冰箱中保存。 主要试剂 Trizol试剂购自Invitrogen公司，Random Prime及RTPCR Kit(K1003S)均购自Promega公司。引物根据NCBI基因库中提供的XIAP(U45880)、βactin(AY582799)cDNA序列，采用引物分析软件Primer Premier 分别在XIAP、βactin基因序列上设计引物。XIAP上游引物5′GGT GAT AAA GTA AAG TGC TTT CAC TGT3′，下游引物5′TCA GTA GTT CTT ACC AGA CAC TCC TCA A3′，产物为188 bp;βactin上游引物5′CAC CAA CTG GGA CGA CA3′，下游引物5′GCA AAG AAC ACG GCT AA3′，产物为498 bp。βactin、XIAP引物均由北京赛百盛基因公司合成。 方法 HE染色 标本经常规固定、脱水、透明、切片和HE染色从组织病理学上确定子宫颈组织的良、恶性以及恶性组织的分级和分期。 提取组织总RNA 在液氮中将标本研磨成粉末，趁液氮尚未挥发光时，将粉末转移到 ml离心管中，总RNA的提取根据Trizol试剂说明书进行，抽提的RNA经1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，用紫外分光光度计检测其浓度和纯度。 反转录及PCR反应 根据RTPCR Kit(K1003S)说明书，将组织总 μg和随机引物 μg反转录合成相应的cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，设置未加cDNA模板的空白对照。PCR反应条件为：预变性94℃ 5min，变性94℃ 40 s，退火50℃ 40 s，延伸72℃ 40 s，共40个循环，再延伸72℃ 5 min。 PCR产物鉴定 取10 μl PCR扩增产物加到含有EB的%琼脂糖凝胶上跑电泳，结果通过全自动数码成像分析系统显示，用Gene Tools from Syn Gene软件分析其条带光密度， 计算 XIAP基因与内参照βactin的光密度值的比值，代表XIAP mRNA的相对表达水平。每个标本重复3次，取平均值。 统计学处理 采用统计软件，计数资料比较采用χ2检验,计量资料以x±s表示，比较采用方差分析。 2 结 果 XIAPmRNA在慢性子宫颈炎组织和子宫颈癌组织中的表达 经过PCR扩增，结果XIAP扩增产物片段为188 bp，βactin扩增产物片段为498 bp，与引物设计相符合。15例慢性子宫颈炎组织中有7例(%)XIAPmRNA表达阳性;43例子宫颈癌组织中有38例(%)XIAPmRNA表达阳性;两者差异显著(P)(图1) 子宫颈癌组织XIAPmRNA表达与病理参数的关系 子宫颈癌组织XIAPmR