缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响临床医学.docVIP

缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：参麦注射液对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响 6 1 材料与方法 7 2 结果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响临床医学 文1：缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响临床医学 急性心肌梗死(AMI)后左室重构是不良预后的强有力预测因素，左室重构包括心肌细胞和细胞外成分改变，进行性心室扩大和收缩功能减弱与不良结果密切相关，胶原基质对左室重构起关键作用〔1〕，保持细胞外基质完整可能限制局部和整体心室重构。细胞外基质结构的完整受基质金属蛋白酶(MMPs)活性的调节〔2，3〕，但MMPs确切作用尚不明确，抑制MMPs活性可能减轻心肌梗死(MI)后心室重构，有利于改善心功能〔4〕。缬沙坦对MMPs和胶原的作用研究尚少，本文研究大鼠MI后给予缬沙坦、安体舒通及合用对大鼠MI后心肌组织MMP2、MMP9表达及胶原水平的影响。 1 材料与方法 动物模型建立和实验分组 健康雄性SD大鼠，由河北医科大学实验动物中心提供，12～15周龄，体重210～260 g。按照 文献 介绍的方法〔4〕，结扎冠状动脉左前降支建立AMI动物模型。心电图示Ⅰ、avl导联ST段抬高1 mv表明结扎成功。另设假手术组，不结扎冠状动脉。24 h后MI动物随机分为模型组(n=24)、缬沙坦组(n=24)、安体舒通组(n=24)和合用组(缬沙坦+安体舒通,n=24)，各组再分为不同时间段，即1、2、3 w不同时段。缬沙坦组药物剂量30 mg·kg-1·d-1,安体舒通组药物剂量20 mg·kg-1·d-1,合用组(缬沙坦30 mg·kg-1·d-1+安体舒通20 mg·kg-1·d-1)。药物加生理盐水2 ml配成溶液，直接灌胃给药，每日1次。假手术组和对照组大鼠灌等量生理盐水。3 w时取材，麻醉后开胸，取出心脏，在冰上操作，于冰生理盐水中冲去残余血液，在梗死区周围剪取心肌组织，迅速置于液氮罐内保存，再转至-80℃ 冰箱保存。 MMP2、MMP9的 mRNA测定 心肌组织总RNA的提取：Trizol试剂盒购自美国Promega公司，缬沙坦由诺华公司提供，安体舒通为杭州民生药业集团有限公司产品，引物为北京华美生物工程公司产品。取心肌组织约100 mg,按实验操作规程提取RNA，之后进行RTPCR。MMP2引物序列：正义：5′GAGTTGGCAGTGCAATACCT3′，反义：5′GCCATCCTTCTCAAAGTTGT3′，MMP9引物序列：正义:5′CGGTATTGGAAGTTCTCGAAT3′，反义:5′CACACGCCAGAAGTATTTGTCATG3′。参照文献，进行MMPs引物设计及合成。PCR配制反应体系，反应体系构成如下10×PCR缓冲液5 μl，25 mmol/L MgCl2溶液3 μl，2 mmol/L dNTP5 μl，50 pmmol/L上游引物1 μl，50 mmol/L下游引物1 μl，cDNA 2 μl，TaqDNA聚合酶(3 U/μl) μl，DEPC水 μl。进行PCR，扩增后进行电泳及凝胶分析，紫外透射仪上观察结果，读胶仪读取各电泳条带的光密度值，结果以MMP2、MMP9与βactin光密度比值表示。 心肌组织免疫组化染色 心肌组织用石蜡包埋后，以6 μm的厚度连续切片，进行MMP2、MMP9的免疫组化染色。方法如下：石蜡切片脱蜡至水，3%甲醇双氧水室温孵育10 min，消除内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗，%PBS缓冲液()洗5 min， ml枸橼酸缓冲液()微波抗原修复98℃ 20 min，冷却至室温，10%正常家兔血清稀释封闭，滴加1∶50稀释MMP2、MMP9一抗4℃冰箱过夜，在清洗后，加入DAB显色剂5 min，自来水终止显色，常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。阴性对照用PBS替代一抗，其余步骤同上。实验结果判定：在细胞浆内表达，阳性反应均呈棕黄色或黄色。 心肌胶原含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原的测定 采用氯胺T法：取冻存心肌组织50 mg,经脱水、脱脂，沉淀烘干并研成粉末，加入6 mol/L盐酸2 ml，110℃ 水解 h，调节pH至，按说明书要求，用Beckman的紫外分光光度计，测各管OD