亚砷酸联合粉防己碱抗乳腺癌作用机制研究.docVIP

亚砷酸结合粉防己碱抗乳腺癌的作用体制研究 亚砷酸结合粉防己碱抗乳腺癌的作用体制研究 PAGE / NUMPAGES 亚砷酸结合粉防己碱抗乳腺癌的作用体制研究 亚砷酸结合粉防己碱抗乳腺癌的作用体制研究 研究目的和意义 : 最近几年来 , 中医药治疗乳腺癌在临床治疗和基础研究方面都 获得了很好的进展 , 从中药中挑选抗肿瘤药物已成为国内外研究的热门。当前研 究发现砷剂和粉防己碱 (Tetrandrine,Tetra) 均拥有较好的抑癌作用 , 但是砷剂 的毒性问题对其临床应用造成了必定的困扰 , 亟待解决。 本课题依据“防己杀雄黄毒”理论 , 将这两味药的有效成分砷和粉防己碱联 合应用于乳腺癌细胞 , 从克制乳腺癌细胞增殖的角度商讨相杀配伍能否拥有共同 增效以减毒的作用 ?并进一步从凋亡、自噬、坏死以及细胞周期阻滞等方面探究 亚砷酸钠 (NaAsO2)结合粉防己碱 (Tetra) 引诱乳腺癌细胞增殖克制的有关分子机 制 , 发掘 MAPK信号通路及活性氧 (Reactive oxygen species,ROS) 在结适用药诱 导细胞死亡过程中的作用。 同时 , 研究 NaAs02结合 Tetra 可否引诱乳腺癌细胞分 化 , 并探究其引诱分化的详细分子体制 ; 以及结适用药对人外周血单个核细胞 (Peripheral blood mononuclear cell,PBMC) 中 CD4+CD25+Foxp3+调理性 T 细胞 的影响。 以期为临床应用 NaAs02结合 Tetra 治疗乳腺癌供给实验依照 , 对中药药对的 推行应用拥有重要的理论和实质意义。研究方法 :(1)NaAsO2 结合 Tetra 对乳腺 癌细胞增殖、凋亡、自噬、坏死以及细胞周期阻滞的影响分别以梯度浓度 NaAsO2、 Tetra 单用及联用干涉乳腺癌 MDA-MB-231及 T47D细胞 , 以 XTT法检测细胞增殖 状况 , 以流式细胞术剖析检测凋亡率、细胞周期 ,Western-Blot 法检测自噬有关 蛋白、线粒体凋亡通路有关蛋白、 MAPK信号通路蛋白的表达。 分别检测自噬克制剂 Wortmannin、ROS克制剂 NAC及 Trolox 、 MAPK各信号 通路克制剂对 MDA-MB-231增殖克制率、细胞凋亡率、坏死率、细胞周期以及自 噬标记蛋白 LC3、Beclin-1 的影响。检测 NaAsO2结合 Tetra 作用后细胞内 ROS 含量的变化。 经过 Transwell 小室实验检测 NaAsO2结合 Tetra 作用后对细胞迁徙的影响。 (2)NaAsO2 结合 Tetra 引诱乳腺癌细胞分化分别以梯度浓度 NaAsO2、Tetra 单用 及联用干涉乳腺癌 MDA-MB-231、MCF-7及 T47D细胞 , 流式细胞术检测乳腺癌分化 标记物 ICAM-1 免疫荧光 ,Western-Blot 法检测 ICAM-1、p-ERK、ERK、HER2等细 胞分化有关蛋白的表达。 分别检测应用 ERK克制剂对三种细胞 ICAM-1免疫荧光的影响 , 初步揭露结合 用药引诱分化的详细分子体制。 以亚砷酸注射液、 汉防己甲素注射液单用及联用 干涉乳腺癌移植瘤裸鼠 ,Western-Blot 法检测肿瘤组织内 ICAM-1、p-ERK、ERK、 HER-2平分化有关蛋白的表达。 (3)NaAsO2结合 Tetra 对 PBMC中 CD4+CD25+Foxp3+调理性 T 细胞的影响。用 淋巴分别剂分别人外周血获取人外周血单个核细胞细胞 (PBMC),分别以梯度浓度 NaAsCh、 Tetra 单用及联用干涉 PBMC细胞 , 以 XTT法检测药物对 PBMC增殖的影 响。 用流式细胞术检测药物干涉后 CD4+CD25+Foxp3+调理性 T 细胞群比率的变化 , 探究 NaAs02结合 Tetra 对免疫功能的影响。研究结果 :NaAsO2和 Tetra 单用或 联用可克制 MDA-MB-231、T47D细胞的增殖 , 且呈剂量依靠性 , 而且联用成效优于 独自用药。 MDA-MB-231对 Tetra 的敏感性高于 T47D细胞 , 结适用药对 MDA-MB-231细胞 的增殖克制成效优于 T47D细胞。 NaAsO2结合 Tetra 可引诱 MDA-MB-231细胞及 T47D细胞凋亡。 其引诱的 MDA-MB-231细胞凋亡拥有剂量依靠性实时间依靠性 , 为 caspase 非依靠性 , 且结适用药加强了独自用药时的凋亡引诱成效 , 并可达到与他莫昔芬 (TAM)一致的凋亡引诱成效。其引诱的 T47D细胞凋亡与 caspase-8 活化有关 , 可 能经死亡受体门路引诱凋亡。 横向比较同样药物浓度作用时两细胞的