生物工程下游技术第五章细胞破碎、蛋白质复性和固液分离.pptVIP

分离因数: a= (rω2:离心力)/g a——衡量离心力的大小主要指标,应该主要是增大角速度而不是直径。 提高离心效果可通过增加转速和延长时间来取得。 (rω2:离心力):固液分离最重要的影响因素 转筒常规工业用离心机（--张家港华大离心机公司） SSC型离心机为三足式上部人工卸料沉降离心机，该系列离心机装鼓壁上无孔，属沉降型转鼓，操作维修方便。主要适用于固相颗粒细小，悬浮液粘性较大，过滤介质再生困难，且含量较少的悬浮液的固液分离。  管式工业用离心机（--张家港华大离心机公司） 悬浮液从进料管进入转鼓，固相颗粒在离心力场作用下受到离心力的加速沉降至转鼓内壁，沉降的颗粒在螺旋输送器叶片的推动下，从（直筒段）沉降区通过（锥段）干燥区至固相出口排出；经澄清的液相从溢流孔溢出。从而实现固、液相自动、连续的分离。 可应用于脱水、浓缩、分级澄清等不同场合。 刮刀卸料工业用离心机（--张家港华大离心机公司） 主电机带动套装的内外转鼓全速旋转，物料由进料管引入转鼓，在离心力作用下，液相物穿过滤布和内转鼓壁滤孔排出内转鼓，汇集到内外转鼓间的间隙内，穿过到虹吸室的通孔进入虹吸室，再由虹吸装置抽走排出机外。固相物截留在内转鼓形成环形滤饼层。进料达到预定容积后停止进料，进一步分离，此时可进行洗涤。洗涤、分离结束，刮刀自动旋转，将固相物刮下经输料螺旋排出机外，然后自动洗网，开始下一个循环。 二、微孔膜过滤 根据流体各组分尺寸大小的不同，利用高分子聚合膜，过滤分离微米级的细胞、细胞碎片和生物大分子的过程。 何谓微孔膜过滤？ 切割分子量? MWCO 微滤（0.1~10μm)：分离固体颗粒 超滤（0.001~0.1μm)：浓缩大分子物质 反渗透（0.001μm)：从小分子中脱除水分 微孔膜过滤的3种方式： 缺点： 技术难以掌握，影响因素多； 稳定性和重复性不好； 膜堵塞问题难以解决！ 微孔膜过滤特点 优点： 容易做到封闭式操作，不受环境污染 设备投资少，操作安全； 加工量可大可小，十分方便； 有利于分离密度差小而难以离心的固体，可直接用于下游的层析过程。 微滤技术要点： 选择合适的膜： ①不与蛋白质、脂类等发生吸附； ②孔径合适。 不锈钢板式过滤器 不锈钢杯式过滤器 正压过滤器 机电一体式微滤过滤系统 微滤技术要点： 2.选择合适的操作条件： 过滤方程（达西公式）： V=ΔP/[μ(Rc+Rm)] V：过滤速度，ΔP：压力差，μ：滤液粘度，Rc：滤饼阻力，Rm：过滤介质（膜）的阻力。 ΔP恒定，Rc增加，V降低 保持V不变则需阻止滤饼生成或不增厚。若Rm和μ不变，则V恒定，因为ΔP增加会加大Rc。 3.膜材料的新发展——无机陶瓷膜 优点：（机械强度大、惰性更大） 孔径均匀，过滤效果好； 耐蒸气消毒、耐酸碱和有机溶剂； 坚固耐用，使用寿命长； 可以加压反向冲洗 缺点：造价高；过滤面积小；表现对蛋白质一定的吸附； 优点（相对机械破碎）： 对产物释出有一定的选择性； 细胞保持完整，碎片少，利于进一步提取； 核酸释放量少，黏度低，便于进一步分离。 缺陷： 时间长，效率低； 化学试剂有毒； 通用性差 5、酶溶法 机理：利用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解。 常用的溶酶：溶菌酶(lysozyme)、β-1,3-葡聚糖酶(glucanase)、β-1，6-葡聚糖酶、蛋白酶（protease)、甘露糖酶(mannanase)、肽链内切酶（endopeptidase)、壳多糖酶(chitinase)、细胞壁溶解酶（几种酶的复合物）等。 优点： 一定的选择性； 细胞外形完整，核酸释放少，有利于进一步分离过程 缺点：（只能用于实验室） 产物抑制造成效率低下； 溶酶价格高； 通用性差， 不易确定最佳条件； 6、微波加热法 机理：微波加热导致细胞内极性物质，尤其是水分子吸收微波能，产生大量热量，使胞内温度迅速上升，液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲裂，形成微小孔洞，进一步加热可导致细胞内部和细胞壁水分减少，细胞收缩，表面出现裂纹。 优点： 微波穿透性强，选择性高、加热效率高。 缺陷： 一般只适合对热稳定物质的分离； 被处理的物料要具有良好的吸水性； 不适于富含淀粉和树胶等的天然植物 机械破碎法与非机械破碎法的比较 比较项目 机械法 非机械法 破碎机理 切碎细胞 溶解局部壁膜 碎片大小 碎片细小 细胞碎片较大 内含物释放 全部 部分 黏度 高（核酸多） 低（核酸少） 时间，效率 时间短，效率高 时间长，效率低 设备 需专用设备 不需专用设备 通用性 强 差 经济 成本低 成本高 应用范围 实验室，工业范围 实验室范围 克隆表达的产物 基因工程细胞 蛋白质 没有活性，一级结构正确，立体构型错误，无生物学活性！——包涵体 第三