第十一章荧光分析法.pptVIP

3）机理： a碰撞失去能量 b生成不发光的配合物 c溶解氧的存在使荧光物质氧化或氧分子的顺磁性 使激发单重态分子转变为三重态 d浓度较大，自熄灭现象 * 5.散射光 瑞利光：弹性碰撞，不发生能量交换，仅改变方向， 波长与入射光相同 拉曼光：非弹性碰撞，改变方向同时能量交换，波长 长移或短移。 散射光对荧光测定有干扰 尤其是波长与荧光波长接近的拉曼光 选择适当的溶剂和激发波长，可消除拉曼光的干扰 * 320 360 448 350 448 320 360 350 400 激发320nm 硫酸奎宁 激发350nm 硫酸奎宁 激发320nm 0.1mol/LH2SO4 激发350nm 0.1mol/LH2SO4 强度 强度 λ/nm λ/nm * 第二节 荧光定量分析方法 一、 特点 1.灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级； 检测下限：10-10～10-12g/ml 2.选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； 3.试样量少 缺点：应用范围小。 * 二、定量依据与方法 1.定量依据 荧光强度F正比于吸收的光强（I0－I） 浓度很低时(Ecl≤0.05) ，将括号项近似处理后： * 2.定量方法 1）标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标 准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强 度，在标准曲线上求出浓度； * 2）比例法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度 3）多组分样品的荧光分析 a无相互干扰，分别测定 b有干扰，同紫外－可见吸收光谱定量方法 解联立方程组法 等吸收双波长消去法 * 第三节 荧光分光光度计 1.测量荧光的仪器主要由四个部分组成： 激发光源、双单色器系统、样品池、检测器。 2.特殊点：有激发和发射两个单色器，光源与检测器通 常成直角。 3.光源：氙灯（250-700nm） 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光 (测量)波长的第二单色器； 样品池：石英比色皿 检测器：光电倍增管。 * * * * 第十一章 荧光分析法 （Fluorescence） * 概述 分子发光（molecular luminescence） 某些物质分子吸收能量跃迁到较高的电子激发态后，返回基态的过程中伴随发光的现象。 M+ 能量 →M＊ M hγ * 分类 光致发光（PL） 生物发光（BL） 化学发光（CL） 电致发光（EL） 磷光 荧光 荧光分析法: 根据物质所发射的荧光谱线的位置及强度进行物质鉴定和含量测定的方法。 原子荧光 紫外可见荧光 红外荧光 X射线荧光 分子荧光 光致发光：分子吸收某种波长的光后发射出比原来吸收光的波长更长的光的现象。 M+ h? →M＊ M h?’ 荧光：物质分子接受光子能量被激发后， 从激发态的最低振动能级返回基态时发射的光。 * 第一节 荧光分析法的基本原理 一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 1.分子的电子能级与激发过程 分子的电子能级中包括振动能级和转动能级 根据“能量最低原则”和“Pauli不相容原则”，基态时分子中的电子对填充在能量最低的轨道，且自旋相反，即总自旋量子数s为0 基态 电子能级多重性：M＝2s+1 单重态S M＝1 自旋相反 三重态T M＝3 自旋相同 * 被激发跃迁过程中： 通常电子不发生自旋方向的改变,电子对自旋相反， 总自旋量子数s为0,处于激发单重态。 电子发生自旋方向的改变,电子对自旋相同，总自旋量子数s为1,处于激发三重态，比激发单重态能量低。 * hγ（荧光） hγ（磷光） 几率小（禁阻） 10-8s 10-4~10s 2.荧光的产生 吸收紫外可见光，基态电子跃迁到单重激发态的各个不同能级上。激发态不稳定，释放能量返回基态。发射荧光是其中一条途径。 能量： S2 ＞T2 ＞ S1 ＞ T1 ＞ S0 * * * 1）振动弛豫 激发态分子通过与溶剂分子碰撞而将部分能量传递给溶剂分子，其电子由同一电子能级激发态的较高振动能级回到最低振动能级的过程。10-12 s 2）内部能量转换 两个电子激发态能级相差较小，