Q5B：源自重组DNA技术的蛋白质产品的表达载体分析.pdfVIP

ICH DNA Q5B 第四阶段 1995 年11 月30 日通过 本指导原则按ICH进程由相应的ICH 专家组制定并经各 药品管理部门协商进入第四阶段，推荐给欧盟、日本和美国 的管理机构。 1 Q5B 第一次 历史 日期 新汇编2005 汇编 年11 月 在第2 步基础上由指 1995 年3 Q5B 导委员会批准，并向 Q5B 月28 日 公众征求意见 现行第四版 在第4 步基础上由指 导委员会批准，并推 1995 年11 Q5B Q5B 荐给三方ICH 监管机 月30 日 构采纳 2 DNA ICH 1995 年 11 月30 日在ICH 指导委员会会议上完成第4 步并推荐给三方ICH 监管机构采纳。 I 引言 本文件旨在为用真核和原核细胞生产重组 DNA 蛋白产 品的表达载体的鉴定提供指导，内容仅与评估重组DNA 蛋 白表达构建载体时的相关信息有关，不涵盖重组 DNA 来源 的医药产品的所有质量的内容。 表达载体的定义为含有重组蛋白的编码序列的表达载 体。为保证终产品的质量和一致性，应使用核酸技术并结合 其他用于纯化重组蛋白的方法来分析表达载体。由于这部分 的分析的内容是评价重组基因的编码序列，而不包括翻译的 忠实性以及重组蛋白的其他特征如二级结构、三级结构和翻 译后修饰，所以对表达载体在核酸水平上的分析只能视为产 品整体质量评价的一部分。 Ⅱ 表达构建体分析的基本原理 表达载体分析的目的是确保产品的正确编码序列被导 入到宿主细胞，并从培养开始到生产结束保持不变。在活细 胞中产生的重组蛋白，其基因序列可能发生突变而改变蛋白 质的性质，从而对病人产生潜在的副作用。目前没有一种单 独的试验方法能检测蛋白质分子中所有可能发生的修饰。蛋 白质分析技术是用于估测蛋白质的氨基酸序列和由于翻译 3 后修饰如蛋白水解、糖基化、磷酸化、乙酰化等作用形成的 结构特征。因为蛋白质分析方法有时不能检测到所有重组蛋 白编码序列突变造成的蛋白质结构变化，所以从核酸分析中 得到的资料对确定蛋白质结构也是有用的。对于不同的产品， 核酸分析和蛋白分析的相对重要性各有不同。 核酸分析可用于验证表达载体的编码序列和物理状态。 核酸分析的目的不是为了检测少量变异序列，而是为了能确 保被表达的蛋白有正确的氨基酸序列。当生产细胞有多个整 合的表达构建体拷贝时，并非所有的拷贝都具有转录活性， 因此通过对mRNA 或 cDNA 的分析测定转录产物本身，会 比对基因组DNA 的分析更合适。测定成批核酸的分析方法， 如对混合克隆或聚合酶链反应扩增产物进行测定，可能替代 依靠选择单一 DNA 克隆的方法。以上方法之外，当然也可 考虑其他能快速、灵敏地确证表达载体中重组蛋白的编码序 列的方法。