抗原抗体反应（课堂PPT）.pptVIP

2021/3/29 2021/3/29 (2)特异性与亲和力: 特异性和亲和力是影响血清学反应的两个关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。 免疫动物早期获得的抗血清特异性较好，但亲和力低；后期获得的抗血清一般亲和力较高，但长期免疫易使免疫血清中抗体的类型和反应性变得更为复杂。 因此，用于诊断的试剂必须尽量选用特异性高、亲和力强的抗体，才能保证和提高试验结果的可靠性。 2021/3/29 （3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。 2021/3/29 l.电解质 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。通常在血清学试验中，以8.5% NaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。 二、环境因素 2021/3/29 2021/3/29 2.酸碱度 合适的pH是抗原抗体反应的必要条件之一。血清学试验一般以pH6-9为宜，超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质，导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时，接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸凝集，造成假象。 2021/3/29 2021/3/29 3.温度 抗原抗体反应一般在15-40℃范围内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物解离;温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反应需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。 2021/3/29 2021/3/29 4、作用时间 抗原抗体反应应有足够的时间，不同反应时间不同。 2021/3/29 此外，抗原抗体反应在液相中反应时，适当振荡与搅拌，也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。 2021/3/29 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 二、环境因素 2021/3/29 反应类型 实验技术 结果判断 凝集反应 直接凝集试验 观察凝集现象 间接凝集试验 同上 抗球蛋白试验 同上 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀，检测浊度 免疫电泳技术 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 补体参与的反应 补体溶血试验 观察测定溶血现象 补体结合试验 同上 第四节 免疫学检测技术的类型 2021/3/29 第一章 抗原抗体反应 免疫学诊断技术概述 (4学时) 检测抗原制备技术 2021/3/29 第一节 抗原抗体反应的原理第二节 抗原抗体反应的特点第三节 影响抗原抗体反应的因素第四节 免疫学检测技术的类型 2021/3/29 第一节 抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应，主要是指抗原和抗体在体外结合所表现的反应。由于抗体主要存在于血清中，并且临床上多用血清做试验，所以体外实验中的抗原抗体反应曾称作血清学反应（serological reaction)。但是随着免疫学的发展，血清学的含义已不能概括目前的研究内容，现在多以抗原抗体反应代替血清学反应一词。 Ag:Antigen Ab:Antibody 2021/3/29 第一节 抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 物质基础: 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体 2021/3/29 静电引力 （electrostatic forces） 范德华引力:作用最小 （van der Waals interactions） 氢键:最具特异性 （hydrogen bond ） 疏水作用力:作用最大 （hydrophobic interactions） 抗原抗体结合力示意图 一、抗原抗体结合力 2021/3/29 l. 静电引力 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互的引力，称为静电引力，又称库伦引力。 例如，抗体分子上带电荷的碱性氨基酸的游离氨基(-NH3+)和酸性氨基酸的游离羧基(-COO-)可与抗原分子上带相反电荷的对应基团相互吸引。这种引力的大小与两个相互作用基团间的距离平方成反比。 2021/3/29 2.范德华引力 抗原和抗体相互接近时，由于分子