2022年微生物学实验.pptxVIP

江苏师范高校生命科学学院 《卓培班》 微生物学试验 吕爱军 2021年3月;1.培育基的制备及高压蒸汽灭菌 2. 器皿的清洗包装及干热灭菌 3. 试验室环境和人体表面微生物的检查 4. 无菌接种技术;培育基配方：;(1)培育基的配制： 先将试管贴好标签；注明培育基名称，组别，日期；标签粘贴位置在离管口1/3管身处； 留意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹； 操作图示：;(2) 高压蒸汽灭菌 一般培育基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min 试验步骤：;摆斜面;倒平板 将菌液分别样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的菌液移至无菌培育皿中，然后将融解，凉至50℃左右的培育基，在每个培育皿内各倒入约15 ml，摇匀，凝固，制成平板； ;2. 器皿的清洗包装 及干热灭菌;(2)干热灭菌法 所需温度(160-170℃)，时间长(1-2h)； 试验步骤:;(1)写标签： 在皿底上 (2)接种环境或体表微生物 手指（洗前后），头发，咳嗽，抹布，空气，硬币等 (3)培育：37 ℃培育24h-48h; 常用的几种方法如下： 斜面接种 液体接种 平板接种;1)斜面接种示意图;***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第13页***;2)平板划线法： 将菌液分别样品摇匀，以无菌操作用接种环直接取试管中待分别纯化的菌液，将接种环通过稍打开皿盖的缝隙（约30℃）伸入平板，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去余外的菌种，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30-40℃，以手腕力气在平板表面轻巧滑动划线,接种环不要嵌入培育基内划破培育基,线条要平行密集，充分利用平板表面积，留意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环，待冷却后放置接种架上； ;1.细菌的单染色 2. 革兰氏染色 芽孢染色 4. 酵母菌外形观看，死活细胞鉴别;现场演示;1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏； 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光滑度 3.观看标本时，必需依次用低，中，高倍镜，最终用油镜；当目视接目镜时，特殊在使用油镜时，切不行使用粗调剂器，以免压碎玻片或损耗镜面； 4.拿显微镜时，肯定要右手拿镜臂，左手托镜座，不行单手拿，更不行倾斜拿；;显微镜操作;（1）初染：于制片上滴加结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料； （2）滴加卢戈氏碘液，1min后水洗： （3）滴加95％乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(依据涂片之厚薄需时30s至1min)； （4）复染 滴加石炭酸复红液复染1min，水洗； （5）用滤纸吸干，油镜镜检； ;3.芽孢染色法 (1)取37℃培育18～24h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定； (2)于载片上滴入3～5滴5％孔雀绿水溶液； (3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上显现蒸汽时，开头运算时间约4～5min；加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料； (4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止； (5)用0.5％沙黄水溶液(或0.05％碱性复红)复染1min，水洗； (6)制片干燥后用油镜观看；芽孢呈绿色，菌体红色；;制片→染色（孔雀绿5min）→水洗→复染（蕃红花红2-3min）→水洗→干燥→镜检;在载玻片中心加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；;将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观看酵母外形和出芽情形，并依据颜色区分死活细胞；;综合设计试验三