微生物课件（老师版） 第4章 细菌感染的检查方法与防治原则.pptVIP

第四章 细菌感染的检查方法与防治原则 （一）标本采集与运送原则 （二）细菌形态与结构的检查 1.普通光学显微镜检查 2.电子显微镜检查 普通光学显微镜(light microscope) 1.普通光学显微镜检查 （2）染色标本检查法 1）革兰染色（ Gram stain ） 最经典、最常用的染色方法。 标本在分离培养前都要进行革兰染色、镜检。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类，可初步识别细菌，有助于进一步鉴定。 革兰染色法（Gram stain）  革兰染色法的原理（细胞壁结构学说） 革兰染色意义 2）抗酸染色法（ acid-fast stain ） 结核杆菌抗酸染色 2.电子显微镜(electron microscope) 扫描电子显微镜（SEM） 荧光显微镜 荧光显微镜 荧光显微镜 结核分枝杆菌 （荧光染料金胺O法） （三）细菌分离培养与鉴定 细菌的分离培养是确诊细菌感染金标准。 1.分离培养 2.形态学检查 3.生化试验 4.血清学试验 5.动物试验 6.药物敏感试验 1、平板划线法（分区划线法） SS平板 2. 染色及形态学检查 结核杆菌抗酸染色 破伤风梭菌 3.生化反应--鉴别细菌各种api试剂条和配套试剂 Api微量生化反应试剂 全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK 32/60/120 5.动物试验—毒力 5.药物敏感试验 纸碟法 试管稀释法 E试验 图 1.酶免疫技术（EIA ） 2.协同凝集试验 3.免疫荧光技术（IF） 4.对流免疫电泳 1.酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验 3.免疫荧光技术 指用荧光素标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 常用荧光素有异硫氰酸荧光素、R-藻红蛋白等。 优点：特异、敏感、快速、能定性和定量甚至能定位，且易于观察。 免疫荧光技术示意图 免疫荧光技术示意图 （五）检测病原菌核酸 1.核酸杂交 2. PCR 3.基因芯片 PCR技术 PCR技术应用 （六）其他检测方法 1.鲎试验 内毒素的检测 鲎试验 鲎血液中的有核变形细胞含有凝固酶原和可凝固蛋白； 与待检标本中的内毒素接触，凝固酶原成为凝固酶，使可凝固蛋白凝集成凝胶状态。 2.气相色谱分析 气相色谱分析 气-液相色谱技术为确诊厌氧菌感染的标准方法。因其昂贵的设备而减少。 厌氧菌不能氧化营养物质产生CO2和H2O，只能发酵形成挥发性短链脂肪酸、有机酸和醇等，因此气-液相色谱技术对一些难于鉴定的厌氧菌特别有用。 用已知细菌或特异性抗原检测血清中的抗体。 主要适用于抗原性强的致病菌和病程较长的感染性疾病。 血清学诊断（查抗体） 用已知的细菌或抗原，检查病人血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。 但病人恢复期血清的抗体效价必须比急性期者增高4倍或以上，方有诊断意义。如肥达试验，外斐试验等。 肥达试验（Widal test）试管凝集反应 第二节 细菌感染的防治原则 一、细菌感染的特异性预防 （一）人工免疫的概念和种类 采用人工方法将疫苗、类毒素等免疫原性物质或含有某种特异性抗体的免疫血清、免疫细胞制剂接种人体，使机体获得某种特异性免疫力，从而预防和治疗某种疾病的方法。 包括人工主动免疫和人工被动免疫 生物制品：疫苗、菌苗、类毒素、免疫血清、人血液制品、诊断用品、生物技术制品等。 （二） 人工主动免疫 将疫苗及类毒素（抗原）接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力。 主要用于特异性预防。 人工主动免疫 （一）疫苗 1.???死疫苗（灭活疫苗）:如伤寒、霍乱、流脑、钩体病等。 2. 活疫苗亦称减毒疫苗：如： BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎、麻疹等。 　疫苗 3.亚单位疫苗：利用微生物的某种表面结构成分（抗原）制成不含有核酸、能诱发机体产生抗体的疫苗，称为亚单位疫苗 。 4.基因工程疫苗: 利用基因工程方法获得带有病原体保护性抗原表位的目的基因，将其导入原核或真核表达系统，表达该种保护性抗原，提纯后研制成疫苗 。 　疫苗 5.重组载体疫苗：将编码某一蛋白的基因转入减毒的病毒或细菌而制成的疫苗。 6. DNA疫苗 （称基因疫苗或核酸疫苗）：将编码保护性抗原的基因重组到质粒真核表达载体上，然后将重组到质粒DNA直接注射到体内，外源基因表达抗原刺激机体产生免疫应答。 我国常用病毒疫苗 活疫苗