基因工程－3章 基因工程载体.pdfVIP

第三章基因工程载体 _ 、概 述 ni 二、质粒载体 三、A噬菌体载体 四、酵母人工染色体载体 771 —、概 述 ® (- )基醜關齡 ® 基因载体 是指运载目的基因进入宿主细胞，使之 : 能得到复制和进行表达的工具 化学本质是DNA分 ， 子。 ® 按来源分 质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、酵 : 母人工染色体载体等。 ® 按功能和用途分 克隆载体和表达载体，表达载体 : 又分胞内表达和分泌型表达载体。 ® 按性质分：融合型载体、非融合型载体。 ® 按受体细胞 原核细胞载体和真核细胞载体。 : ^ 二 基因载体的功能 ( ) ® 运送外源基因高效转入受体细胞。 ® 为外源基因提供复制能力或整合能力。 ® 为外源基因的扩增或表达提供必要的条件。 ( )基因载体具备的特性 三 ①载体能在宿主细胞内进行独立和稳定的DNA 自我复制; 或整合到染色体DNA上，随着染色体DNA 的复制而同 步复制；在载体中插入外源基因后，仍然保持稳定 的复制状态和遗传特性。 ②载体易于从宿主细胞中分离，并进行纯化。 ③载体都具有供外源基因插入的限制性内切核酸酶位 点，即多克隆位点。 ④载体都具有能够观察的表型特征 (遗传标记基因 ， ） 在插入外源基因后可作为重组DNA选择的标志。 ⑤载体本身分子量比较小 可容纳较大外源基因片段。 ， ⑥载体在细胞内的拷贝数高，方便外源基因在细胞内 大量扩增。 ⑦载体在细胞内稳定性高，保证重组体稳定传代而不 易丢失。 ⑧载体都是安全的，不含对受体细胞有害的基因，并 且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物细胞。 (四 报告基因 或称标记基因) ） （ ® 报告基因：基因载体上引入的一些可证 明载体已经进入宿主细胞并可将含有目 的基因的宿主细胞从其他细胞中识别区 分甚至挑选出来的具有特殊标志意义的 基因。 ® 常用的报告基因：抗药性基因、氯霉素 乙酰转移酶基因(cat) 、焚光酶基因(lux) 等。 (四 基因载体的致死效应 ） ® 利用基因载体进行基因克隆时，有时大量的克隆 基因及其基因表达产物对宿主细胞是有害的，不 利于宿主细胞的生长繁殖，甚至可使宿主细胞中 毒死亡的现象。 ® 克服基因载体致死效应的对策： ® ⑴使用严密型质粒来分离、纯化多拷贝的松弛型 质粒上大量表达时 可呈现致死效应的功能性基因 ， ， 即用松弛型质粒与严密型质粒杂交改良。 I ® ⑵使用温度敏感型载体。在较低温度下， 目的基 因不表达 宿主菌可自由生长；当宿主菌增殖达到 ， 一定数量后 提高培养温度 使目的基因大量表达。 ，