探讨如何优化UHPLCMSMS测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法.docVIP

探讨如何优化UHPLCMSMS测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：探讨如何优化UHPLCMSMS测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法 1 1、材料与方法 2 2、结果与分析 4 3、结论 7 文2：自酿葡萄酒与市售葡萄酒中甲醇含量比较 7 1材料与仪器 8 2方法与结果 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 探讨如何优化UHPLCMSMS测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法 文1：探讨如何优化UHPLCMSMS测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法 赭曲霉毒素是多种霉菌产生的次级代谢物，是一种真菌毒素。现已发现有7种曲霉和6种青霉菌能产生赭曲霉毒素，但大部分由纯绿青霉、赭曲霉和碳黑曲霉产生[1]。赭曲霉毒素分为赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B和赭曲霉毒素C等。毒性最大、分布最广、对人体伤害最大的是OTA，主要毒性有肾脏毒、肝毒、致畸、致癌等[2]。由于葡萄的生长环境和葡萄酒的酿制工艺等原因，经常会造成赭曲霉毒素的污染[3，4]。刘青等[5]对9个国家中的11种不同种类的葡萄酒进行筛查，OTA的检出率高达%，检出浓度为～μg/L，有4个样本超过2μg/L。我国GB2761—2017标准[6]和欧盟法规[7]规定OTA在葡萄酒中的最大残留量为2μg/kg。随着检测技术的不断发展，检测方法的精确度不断提高，同时为提高效率，也需要更加简单、高效的前处理方法。 目前应用于葡萄酒中OTA的检测方法主要有高效液相色谱（HPLC）法[8，9]与高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法[10，11，12，13]。前者的检测灵敏度高，设备普及，适合推广。后者的准确度高、灵敏度高、具有很高的可重现性，但其价格昂贵，检测成本高。在我国—2016[14]标准规定了食品中赭曲霉毒素A的检测方法，样品前处理主要采用固相萃取和免疫亲和柱法，前处理耗时太长，成本过高，并不适用于大批量葡萄酒样品的检测。QuEChE是一种集快速、简单、便宜、有效、可靠、安全于一体的前处理技术，目前广泛应用于农药、兽药残留的分析检测[15，16，17]中。近年来，也逐渐应用于真菌毒素的检测[18，19，20，21]当中。 本研究建立了一种利用UHPLC-MS/MS法测定葡萄酒中的OTA的方法，并基于QuEChE前处理方法对前处理进行优化。开发出无需净化的前处理方法，极大缩短了前处理时间，节约了成本，能满足大批量样品的快速检测需要。 1、材料与方法 材料、试剂及仪器 酒样：葡萄酒为昌黎产红葡萄酒。 试剂：OTA标准品（CAS:303-47-9，10μg/mL，pribolab），乙腈、甲醇和甲酸均为色谱纯，甲酸铵、乙酸钠和无水硫酸镁均为分析纯。 仪器设备：超高效液相色谱（CBM-20A，日本岛津）-三重四级杆串联质谱仪（TRIPLEQUADTM5500，美国AB）、ME204T电子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）、NP-30S漩涡混合器（常州恩培仪器制造有限公司）、摩尔元素型Molecular1815d超纯水机（重庆摩尔水处理设备有限公司）、Velocity14离心机（英国Dynamica）、旋转蒸发仪（德国heidolph） 试验方法 标准储备液：以乙腈+甲醇（50+50）为溶剂配制1μg/mL的OTA标准储备液，于-20℃冷冻保存，有效期为3个月。 标准工作液：将标准储备液稀释至100ng/mL，并逐步稀释成标准曲线浓度/mL、/mL、/mL、/mL、/mL，现用现配。 准确移取葡萄酒样品于50mL具塞离心管中，加入20mL乙腈、醋酸钠和2g无水硫酸镁。漩涡振荡3min使其混匀，8000min下离心10min，取出上清液。残渣重复以上步骤，将两次所得上清液合并，在40℃下旋转蒸发至近干，剩余物质用乙腈-水（30+60）溶液2mL复溶，溶液过有机微孔滤膜（μm）后，留待仪器分析测定。 将不含目标待测物的样品经上述前处理后作为基质空白，向基质空白中加入不同浓度的OTA标准溶液，通过基质标准曲线的斜率与纯溶剂配制标准曲线的斜率之比，来判定葡萄酒基质对OTA的增强或抑制作用。 、检出限（LOD）及定量限（LOQ) 向不含OTA的基质空白溶液添加不同浓度的OTA标准溶液，经有机微孔滤膜（μm）过滤后，MRM模式检测，分析添加浓度与响应值的相关性，得到基质曲线。检出限和定量限分别为基质曲线的最低点浓度的3倍和10倍信噪比（S/N） 向不含OTA的葡萄酒基质中添加不同浓度的OTA标准溶液，添加量分别为1ng/mL、4ng/mL和10ng/mL。经上述步骤处理、检测后，使用基质曲线定量，计算回收率和精密度。 色谱条件：色谱柱：Atl