药物分析第4章 药物的定量分析与分析方法的验证.ppt

特点： 灵敏度高，可达10-10～10-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定 第二节 定量分析方法的特点 (二)荧光分析法 * 第二节 定量分析方法的特点 三、色谱分析法 （一） HPLC 对仪器的一般要求和色谱条件 色谱柱 检测器 流动相 系统适应性试验 理论塔板数 分离度 重复性 拖尾因子 * HPLC 3.测定方法 内标校正因子法 外标法 * 示例一 炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法(附录ⅤD测定) 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(65:35)为流动相，检测波长为244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于1500，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求。 内标溶液的制备 取黄体酮约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。 HPLC * HPLC 测定法 取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液2ml与内标溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。 * 2.GC 第二节 定量分析方法的特点 示例 松节油的含量测定 照气相色谱法(附录Ⅵ E测定) 色谱条件与系统适用性试验 用聚乙二醇(PEG)-20M为固定相，涂布密度为20%；柱温为90℃。理论塔板数按α-蒎烯峰计算应低于1500。 校正因子测定 取正丁醇适量，精密称定，加石油醚(30～60℃)制成每1ml含20mg的溶液，作为内标溶液。另取α-蒎烯对照品约30mg，精密称定，置10ml棕色量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加石油醚(30～60℃)至刻度，摇匀，吸取1μl注入气相色谱仪，计算校正因子。 * 第二节 定量分析方法的特点 测定法 取本品约35mg，精密称定，置10ml棕色量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用石油醚(30～60℃)溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl注入气相色谱仪，测定，即得。 本品含α-蒎烯(C10H16)不得少于70%。 * 第三节 药品分析方法的验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则 缓释、控释制剂指导原则 微囊、微球与脂质体制剂指导原则 细菌内毒素检查法应用指导原则 目的： 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求 效能指标： 评价分析方法的尺度 效能指标包括: 精密度, 准确度, 检测限,定量限,选择性, 线性与范围, 耐用性 * 第三节 药品分析方法的验证 一、准确度（accuracy） 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。 (一)含量测定方法 回收率(Recovery) 回收试验 加样回收试验 3×3，至少9个测定结果 * 第三节 药品分析方法的验证 二、精密度(Precision) 系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。 表示：偏差(d)、标准偏差(s),、 相对标准偏差(RSD) 重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度 中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度 * 第三节 药品分析方法的验证 三、专属性(Specificity) 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。 目视法 信噪比法 S/N=3 四、检测限(Limit of Detection, LOD) 药物能被检出的最低浓度(μg/ml) 五、定量限(Limit of Quantitation, LOQ) 药物能被定量测定的最低浓度(μg/ml) 信噪比法 S/N=10 * 第三节 药品分析方法的验证 影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等 六、线性与范围(Linearity And Range) 待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。 Y=a+bx （r=0.9999) 七、耐用性(Robustness) 测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 * 第三节 药品分析方法的验证 ① ①已有重现性验证，不需验证中间精密度 ②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充 ② ③视具体情况予以验证 ③ * 第三节 药品分析方法的验证 各种含量测定方法对效能指标的要求 1. 容量分析法 用原料药精制品(含量99.5 %)或对照品考察方法的精密度，R