基于生物信息学和分子克隆技术进行雨生红球藻HaeDGAT23研究（生物学资料）.docVIP

基于生物信息学和分子克隆技术进行雨生红球藻HaeDGAT23研究（生物学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：基于生物信息学和分子克隆技术进行雨生红球藻HaeDGAT23研究 1 1、材料和方法 3 2、结果与分析 5 3、结论与讨论 8 文2：信息技术进行英语教学 10 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 17 文章致谢（模板） 17 正文 基于生物信息学和分子克隆技术进行雨生红球藻HaeDGAT23研究（生物学资料） 文1：基于生物信息学和分子克隆技术进行雨生红球藻HaeDGAT23研究 化石能源的过度开采以及煤炭、石油等的大量使用是造成化石能源枯竭、全球气候变暖的主要原因。温室效应的“罪魁祸首”CO2是植物光合作用所必需的底物材料，光合作用过程中，绿色植物可以在光能作用下，将所吸收的CO2和空气中的水分转化成碳水化合物并且释放出O2。微藻是一种诞生于亿万年前并且普遍存在于地球上的光合自养绿色植物[1]，它可以利用光合作用高效吸收CO2，并将其转化为对人类有益的高附加值活性成分，如高蛋白、多糖、虾青素和生物柴油等[2，3，4]。近年来，微藻由于其具有光合效率高、繁殖速度快、生长周期短等优点，被认为是解决能源危机和治理环境污染问题的最佳选择。 三酰甘油（TAGs）是真核生物能量储存的主要形式，同时也是生物柴油原材料的理想来源[5]。植物体内的TAGs合成主要有2种途径：一种是乙酰辅酶A(acyl-CoA）依赖型，也称肯尼迪途径；另一种是不依赖于乙酰辅酶A的代谢途径[6]。其中，肯尼迪途径中TAGs的合成主要是在3种酰基转移酶的作用下将底物acyl-CoA顺序酰基化到甘油分子sn-1、sn-2、sn-3位点的过程[7]。这3种酰基转移酶依次为甘油三磷酸酰基转移酶、溶血磷脂酸酰基转移酶和二酰甘油酰基转移酶[8]。其中，DGAT将酰基CoA上的酰基部分转移到二酰基甘油（DAG）的sn-3位置，从而完成TAGs的最终合成，是TAGs合成过程中的唯一关键限速酶[9，10]。目前，根据DGAT功能域、亚细胞定位等差异将其分为4种类型：DGAT1、DGAT2、DGAT3和WS/DGAT[11，12]。其中，DGAT1和DGAT2是结合在内质网上并编码内嵌于膜酯双分子层的微粒体酶，二者具有不同的拓扑结构；而DGAG3和WS/DGAT是最近刚发现的具有DGAT活性的酶，DGAT3是一种可溶性酶，WS/DGAT除了具有DGAT活性外还具有催化腊酯（Waxester）合成的活性[12，13] 雨生红球藻是一种单细胞真核绿藻，在胁迫条件下（如高温、高光和N胁迫等），雨生红球藻细胞形态由快速生长的绿色营养细胞转变为红色厚壁孢子状态[14，15]，此时虾青素在藻细胞内大量积累以抵御不良环境。天然虾青素具有极强的抗氧化性，抗氧化能力是维生素C的65倍，是β-胡萝卜素的54倍[16]。相较于其他产虾青素来源（红法夫酵母、南极磷虾等），雨生红球藻具有生长速度快、虾青素产量高（达细胞干质量的4%）等优点，是公认的天然虾青素的理想来源[17]；此外，其还可以有效清除氧自由基[17]，具有延缓衰老的功效，目前已被广泛应用于化妆品、食品等行业。 雨生红球藻中虾青素主要以虾青素单酯和虾青素双酯的形式存在，少量以游离形式存在。有研究表明，雨生红球藻受到外界胁迫时，油脂含量会随之增加[18]。超微结构显示，雨生红球藻产生的虾青素酯在虾青素积累期储存于富含TAGs的油体中[18]。有研究表明[19]，DGAT可能是催化虾青素酯化的关键酶。此外，莱茵衣藻、三角褐指藻和小球藻来源的DGAT都具有恢复DGAT缺陷型酵母H1246菌株合成三酰甘油能力的活性[20，21]。然而，雨生红球藻中的DGAT目前尚未见报道。 本研究以同源克隆的方法获得雨生红球藻中DGAT基因，并利用生物信息学手段对其理化性质、高级结构和系统进化关系进行分析，以期为雨生红球藻虾青素酯化问题研究提供理论依据。 1、材料和方法 试验材料 试验所用藻种为雨生红球藻Flotow1844，现保存于山西农业大学分子农业与生物能源研究所。所用藻种培养基为BG11培养基，藻种培养于人工气候培养箱，培养条件设置为温度（23±1）℃、光/暗周期12h/12h、白天光照强度1400lx，并且每8h摇晃一次。 研究所用仪器为：高压蒸汽灭菌锅PanasonicMLS-3781L（日本松下电器产业株氏会社）；超净工作台BoxunBJ-CD（上海博迅实业有限公司）；人工气候培养箱BIC-400（上海博讯实业有限公司）；电泳仪JY-SPCT（北京君意东方电泳设备有限公司）；凝胶成像仪、PCR仪BIO-RAD（伯乐生命医学产品（上海）有限