沙眼衣原体检测方案设计.pdfVIP

目录 1.病例1 2.沙眼衣原体概述1 2.1诱发因素2 3.发病典型症状2 4.检测方案设计2 4.1标本采集类型2 4.2标本要求3 5.衣原体培养染色3 5.1仪器准备3 5.2实验耗材3 5.3检验方法及试剂盒3 5.4实验步骤4 5.4.1标本培养4 5.4.2培养后标本染色4 5.5检验结果5 5.5.1结果审核5 5.5.2结果分析5 5.5.3标本接种后处理5 6.结论6 7.参考文献6 沙眼衣原体检测方案设计 1.病人病例资料 患者李桂凤,女性,39岁,患者两月前出现腰部及下腹部疼痛,于上个月经 期疼痛加重,尤其是前两周小腹胀痛越来越严重,同时伴有其他症状如：白带 数量多,色黄,偶尔还有白带带着血丝,尤以重体力劳动后上述症状加重,故来 我院进行检查。主治医生对其做阴道镜检查后初步诊断为慢性宫颈炎考虑沙 眼衣原体、支原体感染。为求进一步诊疗，主治医生开出宫颈拭子沙眼衣原 体、阴道分泌物、支原体培养、鉴定及药敏的实验室检查。 2.沙眼衣原体的概述 沙眼衣原体是寄生在细胞内的微生物，介于病毒贺立克次体之间。沙眼 衣原体是一种微生物，它有15个血清型，不同的血清型会引起不同的疾病。 临床上将沙眼衣原体大致分为三种生物型，分别是小鼠生物型、沙眼生物型 和性病淋巴肉芽肿生物型，其中二者与人类疾病有关。用间接微量免疫荧光 来测试，沙眼生物型又分为14个血清型，即A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、 H、I、Ia、J、K。沙眼衣原体的传播途径包括性传播、血液传播、间接接触 传播、母婴传播。 2.1诱发因素 （1）体内雌激素水平下降 体内雌激素水平降低可导致阴道壁萎缩，粘膜变薄，阴道上皮细胞内的 糖原减少，局部抵抗力降低，从而易感。 （2）阴道异物 由于阴道内的异物例如手术或治疗遗留的棉球及纱布等长期慢性刺激或 损伤子宫颈，导致机体抵抗力下降进一步加重炎症反应。 3.发病典型症状 频繁发生的妇科病症主要临床表现情况为:因为沙眼衣原体的细菌感染 所导致急性子宫颈炎的症状往往不明显,基本没有特征性的临床症状,如白带 大量增多、阴道出血或者在尿路上有刺激性阴道脱垂，患者白带的量持续增 多。 4.检测方案设计 4.1标本采集类型：宫颈上皮细胞 4.2标本要求： 生殖器是一种外开放性器官，采集标本的过程中要遵循临床无菌操作来 减少标本杂菌污染。阴道内有正常菌群存在，在采集宫颈标本时应避免接触 到阴道壁。因为沙眼衣原体是在感染宿主的细胞内进行繁殖，采集时尽量取 到宫颈的上皮细胞。 （1）CT标本采集步骤 将宫颈暴露于窥器外部时,除去宫颈口周围的粘膜黏液及其分泌物要使 用纱布或棉签,把无菌涤纶拭子伸入宫颈口内4厘米 ,轻轻旋转拭子,稍做停 留,从而获取宫颈上皮层的细胞。拭子被取出后,避免接触阴道壁,随后置于冰 中8h 内送至实验室，如不能及时接种、培养，应将样本放置在-70摄氏度的 冰箱保存。 5.衣原体培养染色 5.1仪器准备 光学显微镜 CO 培养箱 2 5.2 实验耗材 无菌棉签拭子管，RPMI 1640完全培养基，96孔培养板，4孔 培养板，一次加样枪头，HeLa细胞，沙眼衣原体培养液，10%胎牛血清庆大霉 素 10微克/ ml ,万古霉素 5微克/ ml ,两性霉素 b5微克 / ml 的浓度细胞 增殖液 5.3检验方法及试剂盒：衣原体细胞体外培养 5.4 实验步骤 5.4.1 标本培养 （1）在提取到的宫颈上皮层细胞的试管中加入60微升细胞提取液，在试 管中搅动棉拭子，在管口边缘按压拭去其上液体；然后小心将棉拭子从试管 取出丢弃，配成细胞悬液待用，再加入HeLa细胞放入37摄氏度恒温培养箱 中进行细胞培养24小时。 （2）将培养后的HeLa细胞悬液接种于RPMI 1640完全培养基，按每孔 0.2ml加入到96孔的培养板中并加入0.2ml的沙眼衣原体培养液，再置于37 摄氏度恒温培养箱48h-72h。 （3）用加样枪吸出培养液加入到含有小玻片的4孔培养板中,并在其中