Microsoft Word - 荧光实验 分子荧光光谱法测定微量铁的含量.pdfVIP

光谱实验 荧光实验 分子荧光光谱法测定微量铁的含量 一、实验目的 1. 掌握荧光分析法的基本原理； 2. 学习选择荧光激发和发射波长的方法； 3. 熟悉荧光分光光度计的构造、工作原理以及操作方法。 二、实验原理 某些具有 π-π 电子共轭体系的分子易吸收某一波段的光而被激发至激发态， 处于各激发态不同振动能级上的分子，通过无辐射跃迁，释放一部分能量跃迁回 到第一激发态的最低振动能级上，再以辐射跃迁形式回到基态的各振动能级，由 此产生分子荧光。在很稀的溶液 （即吸光度A ＝εbc＜0.05 ）中，物质的荧光强度 IＦ与其浓度 c 有以下关系： I =K φ I εbc (1-1) Ｆ f 0 式中，K 为比例常数，与仪器性能有关；φf 为荧光量子效率；I0 为入射光 强度；ε 为摩尔吸收系数；b 为液层厚度。上式为荧光定量分析的基本关系式。 因此，当仪器参数恒定后，以最大激发波长为入射光，测定最大发射波长处 的荧光强度，IＦ与浓度 c 成正比。 分子荧光光谱法进行定量分析灵敏度高，与紫外－可见分光光度法相比，其 灵敏度高出 2-4 个数量级，现已成为一种重要的痕量分析技术。 铁是人体含量最多的一种微量元素，又是人体最容易缺乏的一种。铁可以参 与血蛋白、细胞色素及各种酶的合成。铁缺乏是导致缺铁性贫血的祸首，缺铁可 导致贫血，免疫功能下降和新陈代谢紊乱；但是过量铁又可以毒害血组织细胞， 严重的可引起再障性贫血等，已被世界卫生组织确定为世界性营养缺乏病之一， 也是我国公共营养主要问题之一，因此测定环境水样中铁量有重要的现实意义。 维生素 B2 又叫核黄素，是体内氧化还原系统的一部分，它的纯制剂为橙黄 色结晶。维生素 B2 能够维持皮肤、指甲、毛发正常发育，保持神经系统正常活 动，是促进组织再生、复原所必需的微量营养素。它可以消除口腔、唇、舌部位 的炎症，缓解眼睛疲劳预防及治疗白内障，促进新陈代谢，协助铁及维生素 B6 的吸收。缺少维生素 B ，会出现口角溃疡、唇炎、舌炎、睑缘炎等病症，还会 2 导致皮炎、失眠、脱发、对光敏感等症状。 维生素 B2 水溶液在 430-440nm 光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在 535 nm 左右，在 pH 6-7 的溶液中荧光强度最大，在 pH 11 的碱性溶液中荧光消失。因 此，测量维生素 B2 的荧光时，溶液要控制在酸性范围内，且须在避光条件下进 行。 在特定条件下 VB2 可以与铁形成配合物而导致其荧光减弱，因此本实验采 用荧光淬灭法来测定微量铁的含量。 O N HN O N N OH OH HO OH 图 1 Vitamin B2 的结构式 三、仪器与试剂 1. 仪器 LS55 荧光分光光度计；25 mL 棕色容量瓶 7 只；5 mL 吸量管 1 只。 2. 试剂 维生素 B （核黄素）；10ml/L 醋酸溶液；亚沸水；维生素 B 储备液（5 mg·L-1 ）， 2 2