乳及乳制品中牛乳酪蛋白成分定性检测-毛细管凝胶电泳法.pdfVIP

T/CNHFA 003—2022 乳及乳制品中牛乳酪蛋白成分定性检测 毛细管凝胶电泳法 1 范围 本文件规定了牛乳、羊乳及其制品中牛乳酪蛋白成分毛细管凝胶电泳定性检测法，方法的最低检出 限为1% （配料质量比）。 本文件适用于牛乳、羊乳及其制品中牛乳酪蛋白成分的定性检测，适用的产品类别包括液态乳 （巴 氏杀菌乳、高温杀菌乳、调制乳、灭菌乳、发酵乳）、乳粉（全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂乳粉、调 制乳粉、乳清粉）、婴幼儿配方乳粉等。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 毛细管凝胶电泳 Capillary gel electrophoresis (CGE) 将起分子筛作用的凝胶聚合物灌注于毛细管中，以高压直流电场为驱动力的对生物大分子进行分析 检测的技术。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 4.1 kD ：kilodalton ，千道尔顿。 4.2 SDS：Sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠。 4.3 Tris ：Tris （Hydroxymethyl ）aminomethane，三羟甲基氨基甲烷。 5 生物安全措施 为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测，所有生物安全防护的设施、 设备和安全管理的基本要求按照GB 19489有关规定执行。 6 方法原理 基于毛细管凝胶电泳的检测原理是通过SDS对样品中蛋白质组分进行变性和附加电荷的处理，采用 毛细管电泳仪对蛋白质组分进行分离，依据牛乳酪蛋白特异性蛋白峰的信号，判定样品是否含有牛乳来 源酪蛋白成分。 7 仪器设备 7.1 毛细管电泳仪：配备二极管阵列检测器或相同功能的仪器。 1 T/CNHFA 003—2022 7.2 分析天平：精度0.1 mg 。 7.3 水浴锅。 7.4 离心机：离心力≥12000 g 。 7.5 微量移液器：0.5 µL～10 µL，10 µL～100 µL，20 µL～200 µL ，100 µL～1000 µL。 7.6 涡旋混匀仪。 7.7 恒温孵育器。 7.8 pH 计。 8 毛细管凝胶电泳测定方法 8.1 方法提要 对于实时荧光PCR检出牛源性DNA成分的样品，可进一步采用毛细管凝胶电泳法检测牛源性酪蛋 白成分。 8.2 试剂和材料 8.2.1 β-巯基乙醇。 8.2.2 十二烷基磺酸钠（SDS）。 8.2.3 SDS-MW 凝胶缓冲溶液：pH=8，0.2% SDS 140 mL 。 8.2.4 SDS-MW 样品缓冲液：100 mmo/L Tris-HCl （pH 9.0 ），1% SDS 50 mL。 8.2.5 10 kD 蛋白内标，5 mg/mL，0.4 mL 。 8.2.6 分子量标记蛋白组标样（10 kD～225 kD ），16 mg/mL，100 μL。 8.2.7 0.1 mol/L HCl 溶液：100 mL，室温避光贮存。 8.2.8 0.1 mol/L NaOH 溶液：100 mL，室温避光贮存。 8.2.9 毛细管电泳分析预备液：以SDS-MW 样品缓冲液与10 kD 蛋白内标为84:1 的体积比例，按照 当天准备分析样品数量加一的量配制毛细管电泳分析预备液。 8.3 制样 8.3.1 干粉或固态样品制备 称取一定量固态样品（配方乳粉、全脂乳粉500 mg，乳清蛋白粉、脱脂乳粉、乳酪样品135 mg）， 置于 10 mL 离心管中，加入水到5 mL 刻度，涡旋振荡，至充分溶解并混合均匀（含有大约15 mg/mL 蛋白质