病毒感染实验诊断.docVIP

适用标准文案 病毒感染实验诊疗 （1）一般原则是特异敏感、迅速和简单。第一依据流行病学和临床特色，初步判断可能感染的病毒。 2）而后依据可疑病毒的生物学特色、机体免疫应答和临床过程，以及病人目前所处的机遇，确立实验诊疗方法。 2. 1）对隐藏期短，发病时还没有抗体产生，可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或核酸。 2）对隐藏期超出十天的感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期迅速诊疗，及差别首次和再次感染。 （3）对可在体内形成连续感染或隐藏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG 抗体有无4倍以上涨高，或直接检测病毒核酸。 4）对原由不明或有新病毒感染时，应收集标本进行病毒分别，同时应采纳双份血清以确认分其余病毒为病原体。 5）对同一症状可有多种病毒惹起的状况，应同时检测几种有关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体。 6）对由多个型别构成的病毒可测定它们的共同抗原。 第一节标本收集与运送 一、标本的收集 采样时间：尽可能在发病的早期，急性期或患者人院的当日进行。 标本种类的选择：依据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感得病毒种类，选择相应部位采纳标本。 常有分别病毒标本的选择： 出色文档 适用标准文案 ．常有标本的收集方法 (1)血液：以无菌取抗凝血10ml。抗凝采纳100n／ml肝素钠。用于分别CMV、HSV，、 黄病毒、EBV、HIV-1及重生儿肠道病毒。 (2)脑脊液：以无菌取脑脊液1～2ml，冰浴马上送检。在4℃可寄存72h。用于分别柯萨 奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。 (3)宫颈或阴道拭子：采纳病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm逗留5秒拿出，冰浴 马上送检。用于分别HSV、CMV。 粪便标本：取2～4ｇ粪便加10ml运送液马上送检，用于分别腺病毒、肠道病毒和轮状病毒。 (5)含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。用于分别流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV 等。 (6)喉拭子：用压舌板防范唾液污染，用拭子采纳咽喉部表面。用于分别腺病毒、CMV、 肠道病毒、HSV、流感病毒等。 (7)尿道拭子及尿液标本：尿道拭子伸人尿道4cm转动3次，以获取许多的上皮细胞，用 于分别CMV和HSV。 尸检标本：死亡后尽早收集各样器官，分别使用器材和容器。二、标本的运送和保留 出色文档 适用标准文案 1.病毒抵挡力衰，室温中简单灭活，用于分别培育的标本要赶快送检，4℃下数ｈ或-70℃。 冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。 2.病毒传递培育基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为克制细菌生长加青霉素100U ／ml和链霉素100μg／ml，为了克制真菌的生长加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg ／ml制霉菌素。 第二节病毒分别与判断 一、病毒的分别方法 组织细胞培育依据细胞的根源、特征和传代次数分为： 原代细胞培育：将细胞悬液。加入营养液培育。形成的单层细胞，称之为原代细胞。 (2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特征。寿命一般为40～50代，如人胚肺细胞。宽泛用于 病毒分别和疫苗制备。 传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特色近似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、 人喉上皮癌细胞(Hep-2)。 2．鸡胚接种鸡胚是用于分别粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的资料。 3．动物接种动物对病毒的敏感性是不一样的，选择适合动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、 豚鼠、猴等常用于分别病毒。 常用于病毒分其余细胞 出色文档 适用标准文案 二、病毒的判断：一定经过全面认识其特征才能获取判断。 依据临床特色，流行病学资料，标本根源，大概认识病毒的一些特征，有助于确认病毒的种类。 动物感染范围及特色病毒感染动物的范围、发病的隐藏期。 细胞培育特色。 综合上述1/2/3资料作出判断。 病毒判断的方法 1）细胞培育的结果观察：病毒增殖后以致细胞发生： ①细胞病变效应(CPE)。细胞肿大，变圆积聚成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞交融形成 多核巨细胞，胞浆内或核内出现嗜酸性或嗜碱性海涵体等； ②不出现细胞病变现象。 ③细胞培育液pH的变化。 （2）中和试验： 病毒与特异性抗体进行免疫反响，使病毒失掉感染性，在细胞培育和活的机体内不出现 出色文档 适用标准文案 病变的试验。常用细胞培育进行中和试验。假如特异性抗体能中和病毒，使之失掉感染性， 不出现细胞病变效应，则该病毒为特异性抗体的同型病毒。 用于病毒的分型诊疗最具敏感和正确性。也可用于检查患者病后或人工免疫后，机体血 清中抗体增添状况。 （3）空斑或蚀斑形成试验： 空斑是指在单层细胞中被病毒感染惹起死亡的细胞地区，四周被活细胞包围。一般而言， 一个空斑是由一个感染性病毒颗粒感染所惹起的。不一样的病毒惹起的空斑形态和大小不一样。 可进行病毒颗粒的计数、纯化，联合中和试验可进行病毒