- 1、本文档共15页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
分光光度法测定水果、蔬菜及 药物中的抗坏血酸 综合性实验 第一页,共十五页。 一、背景知识 抗坏血酸,也叫维生素C,易溶于水。自然界存在两种形式的维生素C:抗坏血酸(还原型VC)和脱氢抗坏血酸(氧化型DHVC),抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸,脱氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。化学名称为:L-3-氧代苏己糖醛酸内酯,分子式为C6H8O6,相对分子质量:176.13。两种天然形式都可被人体利用,体内也能有效地利用两种合成的L-抗坏血酸。 第二页,共十五页。 维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药,预防维生素C缺乏症,提高动物免疫力和抗应急能力,小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病,大剂量VC可以提高动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗能力,它帮助人体对铁的吸收,可防止有害(低密度)胆固醇的氧化。维生素C也是非常有效的自由基清除剂。但维生素C极不稳定,它很容易氧化,加热、暴露于空气中,碱性溶液及金属离子Cu2+、Fe3+等,都能加速其氧化,易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在于新鲜植物如水果、蔬菜中,由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏。 第三页,共十五页。 二、实验目的 1、掌握铁(II)-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法; 2、理解铁(II)-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件; 3、掌握利用配位掩蔽法消除光还原作用的方法; 4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法; 5、了解抗坏血酸测定的意义, 6、了解样品处理与制备、含量测定的全过程。 第四页,共十五页。 三、实验原理 + 2 Fe3+ = + 2 Fe 2+ + 2H+ Fe2+ +3 Phen(邻菲罗啉) = Fe (Phen)3 2+ (红色,λmax =510nm ) Fe3+ (剩余) + 3 Phen(邻菲罗啉)= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + hγ = Fe (Phen)3 2+ Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen 第五页,共十五页。 四、仪器与试剂 仪器: 电子天平;分光光度计(1厘米比色皿); 移液管(5、10 mL);比色管或容量瓶(25或50 mL) 试剂: 100 μg/L Fe3+ 标准溶液; 0.1%(W/V)邻菲罗啉(Phen)溶液; 40μg/mL抗坏血酸; 0.2 mol/L HAc-NaAc缓冲溶液(pH 4.75); 1%(W/V) 氟化钠溶液; 1% HAc溶液。 第六页,共十五页。 五、实验步骤 1、吸收曲线的绘制 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液5.00 mL置于系列洁净50 mL 容量瓶中,依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL,摇匀;再加入5.0mL0.1%(W/V)邻菲罗啉(Phen)溶液,摇匀;加入5.0 mLHAc-NaAc缓冲溶液,摇匀;再加入2.0 mL 1 %(W/V)氟化钠溶液,用水稀释至50 mL,摇匀。同时制作相应的试剂空白。以相应试剂空白作参比,测定不同波长条件下的吸光度A,绘制吸收曲线,选择最大测定波长λmax。 第七页,共十五页。 2. 标准曲线的绘制 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列洁净50 mL 容量瓶中,依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL,摇匀;再加入5.0 mL 0.1%(W/V)邻菲罗啉(Phen)溶液,摇匀;加入5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液,摇匀;再加入2.0 mL 1 %(W/V) 氟化钠溶液,用水稀释至50 mL,摇匀。以相应试剂空白作参比,在最大测定波长λmax处测定吸光度As, 用Excel电子表格绘制标准曲线,并计算回归方程。 第八页,共十五页。 3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备 新鲜水果去皮、去核后 准确称重 组织捣碎机中捣碎 转移至烧杯中 50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混匀 脱脂棉粗滤 精滤液转移至250 mL容量瓶中 1% HAc溶液定容 摇匀,静置 蔬菜去根,洗干净,沥干 待测 或 第九页,共十五页。 4、药片溶液的制备 VC片20片 准确称重 求平均片重后研细 取适量(相当于VC l00 mg)精确称重后 置1000 mL容量瓶 加水到刻度 摇匀,并过滤 弃去初滤液,准确吸取续滤液2
文档评论(0)