分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc.ppt

分光光度法测定水果、蔬菜及 药物中的抗坏血酸 综合性实验 第一页，共十五页。 一、背景知识 抗坏血酸，也叫维生素C，易溶于水。自然界存在两种形式的维生素C：抗坏血酸（还原型VC）和脱氢抗坏血酸（氧化型DHVC），抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。化学名称为：L-3-氧代苏己糖醛酸内酯，分子式为C6H8O6，相对分子质量：176.13。两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合成的L-抗坏血酸。 第二页，共十五页。 维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药，预防维生素C缺乏症，提高动物免疫力和抗应急能力，小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以提高动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗能力，它帮助人体对铁的吸收，可防止有害(低密度)胆固醇的氧化。维生素Ｃ也是非常有效的自由基清除剂。但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2＋、Fe3＋等,都能加速其氧化，易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在于新鲜植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏。 第三页，共十五页。 二、实验目的 1、掌握铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法； 2、理解铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件； 3、掌握利用配位掩蔽法消除光还原作用的方法； 4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法； 5、了解抗坏血酸测定的意义， 6、了解样品处理与制备、含量测定的全过程。 第四页，共十五页。  三、实验原理 + 2 Fe3+ = + 2 Fe 2+ + 2H+ Fe2+ +3 Phen（邻菲罗啉） = Fe (Phen)3 2+ (红色，λmax =510nm ) Fe3+ (剩余) + 3 Phen（邻菲罗啉）= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + hγ = Fe (Phen)3 2+ Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen 第五页，共十五页。 四、仪器与试剂 仪器： 电子天平；分光光度计（1厘米比色皿）； 移液管（5、10 mL）；比色管或容量瓶(25或50 mL) 试剂： 100 μg/L Fe3+ 标准溶液； 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液； 40μg/mL抗坏血酸； 0.2 mol/L HAc-NaAc缓冲溶液（pH 4.75）； 1%（W/V） 氟化钠溶液； 1% HAc溶液。 第六页，共十五页。 五、实验步骤 1、吸收曲线的绘制 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液5.00 mL置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0mL0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0 mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V）氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。同时制作相应的试剂空白。以相应试剂空白作参比，测定不同波长条件下的吸光度A，绘制吸收曲线，选择最大测定波长λmax。 第七页，共十五页。 2. 标准曲线的绘制 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0 mL 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V） 氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。以相应试剂空白作参比，在最大测定波长λmax处测定吸光度As, 用Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程。 第八页，共十五页。 3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备 新鲜水果去皮、去核后 准确称重 组织捣碎机中捣碎 转移至烧杯中 50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混匀 脱脂棉粗滤 精滤液转移至250 mL容量瓶中 1% HAc溶液定容 摇匀，静置 蔬菜去根，洗干净，沥干 待测 或 第九页，共十五页。 4、药片溶液的制备 VC片20片 准确称重 求平均片重后研细 取适量(相当于VC l00 mg)精确称重后 置1000 mL容量瓶 加水到刻度 摇匀，并过滤 弃去初滤液，准确吸取续滤液2