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人参皂甙Rb1对短暂脑缺血后神经元损伤的保护作用（医疗卫生论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“神经病学与精神病学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文6328字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人参皂甙Rb1对短暂脑缺血后神经元损伤的保护作用 2 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：脑缺血后神经元程序性死亡与迟发性神经元坏死 6 1 程序性细胞死亡 6 2 缺血神经元的细胞凋亡 8 3 缺血神经元发生PCD的可能机制 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 人参皂甙Rb1对短暂脑缺血后神经元损伤的保护作用（医疗卫生论文资料） 文1：人参皂甙Rb1对短暂脑缺血后神经元损伤的保护作用 人参皂甙Rb1是从人参中提取的有效成分，对外伤后神经细胞损伤具有保护作用〔1〕。本实验采用大鼠全脑缺血模型，研究人参皂甙对缺血后神经元损伤的保护作用。 1 材料与方法 动物 雄性Wistar大鼠36只，280～320 g，吉林大学实验动物部提供。随机分为假手术组、对照组和人参皂甙Rb1组，每组12只。 试剂与仪器 人参皂甙Rb1由吉林大学白求恩医学部有机化学教研室惠赠。多克隆bcl2抗体、多克隆bax抗体购自美国Cell signaling公司，其他试剂均购自Sigma公司。光学显微镜为日本产Olympus BX51型，震动切片机为德国产Leica VT1000S型。 方法 模型的制备〔2〕 全脑缺血模型的制备采用双侧颈总动脉暂时夹闭法。动物禁食一夜，随意饮水。先以5%(30%O2，70%N2O)氟烷诱导麻醉，然后以2%浓度维持麻醉。尾动脉插管监测动脉血压，同时注射 ml(150 IU/kg)肝素。右侧股动脉插管备用。颈部正中直切口，分离双侧颈总动脉。颞肌下和直肠内分别插入热敏探头，监测头温和体温;手术过程中用恒温毯将头温和体温保持在℃～℃。缺血时先用动脉瘤夹夹闭双侧颈总动脉，然后经股动脉抽血将动脉压降至50 mmHg，缺血时间为15 min。缺血结束后，除去动脉瘤夹并将血液回输。假手术组仅行手术而不进行缺血;对照组为正常缺血组;人参皂甙Rb1组模型制作前3 d给药30 mg/kg，持续给药至缺血后3 d，共6 d。三组动物均在缺血后3 d处死。 脑组织HE染色 将大鼠麻醉、气管插管后连接呼吸机，以3%的氟烷维持麻醉，打开胸腔，暴露心脏，左心室内注射 ml(300 IU/kg)肝素后，将导管经左心室插入主动脉，先以4℃的PBS液冲洗3 min，然后用4℃含有4%多聚甲醛的PBS液灌注3 min，取出脑组织，放于含有4%多聚甲醛的PBS液中固定24 h(4℃)。用震动切片机按13 μm层厚行冠状位切片，挑选背侧丘脑处的脑片用于HE染色。HE(苏木素伊红)染色：将载有脑片的载玻片放置于背光处阴干，用梯度乙醇溶液脱水后置于苏木素溶液中15 s，冲洗干净后，放入Scott溶液中10 s，冲洗后放入伊红溶液中10 s，再经乙醇溶液脱水后进行透明处理，加盖玻片。每个切片均在40倍物镜下任意选择三个视野计算死亡细胞百分比(死亡细胞数/总细胞数) 细胞浆分离〔3〕 大鼠缺血再灌注36 h后麻醉，迅速断头，分离海马CA1区、DG区及皮层脑组织，用液氮冷冻保存。将脑组织称重后，按照重量体积比1∶10加入匀浆缓冲液( mmol/L Tris baseHCl pH ，1 mmol/L DTT， mol/L 蔗糖，1 mmol/L MgCl2， μg/ml pepstatin A，10 μg/ml leupeptin， μg/ml aproptonin， mmol/L PMSF， mmol/L EDTA，1 mmol/L EGTA， mol/L Na3VO4，50 mmol/L NaF，2 mmol/L 焦磷酸钠)，匀浆器抽压35次。匀浆组织液以4℃ 800 g离心10 min，将抽取的上清以4 ℃ 165 000 g离心1 h后所得的第二次上清即为胞浆组分。bradford法测定蛋白浓度后，将其保存于-20℃冰箱备用。 蛋白印迹分析 SDSPAGE凝胶电泳。 μmPVDF膜湿法电转膜。室温下3%BSA封闭1 h。置于摇床上与抗bcl2多克隆抗体(1∶1 000)及抗bax 多克隆抗体(1∶1 000)4℃下孵育过夜。室温下与二抗(抗兔)孵育1 h。再与ECL一起孵育1 min，然后经过曝光，显影，冲洗，定影等步骤，将冲洗后的胶片扫描到电脑中，用Kodak 1D软件测定每一