三七总皂甙对神经干细胞诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病大鼠的影响研究（医疗卫生论文资料）.docVIP

三七总皂甙对神经干细胞诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病大鼠的影响研究（医疗卫生论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“神经病学与精神病学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文9193字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：三七总皂甙对神经干细胞诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病大鼠的影响研究 2 1 材料与方法 2 2 结 果 5 3 讨 论 6 文2：左旋精氨酸对糖尿病大鼠的肾脏保护作用 7 1 材料与方法 8 2 结 果 11 3 讨 论 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 三七总皂甙对神经干细胞诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病大鼠的影响研究（医疗卫生论文资料） 文1：三七总皂甙对神经干细胞诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病大鼠的影响研究 通过筛选不同细胞因子的诱导分化作用发现，白细胞介素1、白细胞介素11、胶质细胞源性神经营养因子、白血病抑制因子配伍可明显诱导大鼠中脑神经干细胞定向分化成多巴胺能神经元〔1，2〕。Carvey等〔3〕应用神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病(PD)大鼠，手术取得一定的疗效，但移植细胞存活率仍较低。三七总皂甙(P)含人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、人参皂甙R1，具有很强的抗氧自由基和抗脂质过氧化作用，目前已广泛应用于心脑血管疾病的治疗。因此，本实验拟将P应用于神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗PD大鼠，观察其对移植细胞的存活及移植疗效的影响，为提高PD移植手术的疗效寻找新的途径。 1 材料与方法 动物 健康的成年雄性SD大鼠，体重220～260 g;孕14～15 d的健康SD大鼠;均由中山大学动物实验中心提供。 方法 试剂 DMEM/F12培养液、B27添加剂、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、10%胎牛血清均购自美国Gibco公司;%多聚赖氨酸、10%小牛血清、6羟基多巴胺、阿朴吗啡，均购自Sigma公司;白细胞介素1α(IL1α)，白细胞介素11(IL11)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)，均购自 RD公司;白血病抑制因子(LIF)购自 PEPROTECH公司;酪氨酸羟化酶抗体购自Santa Cruz公司;巢蛋白抗体、微管相关蛋白2抗体、胶质纤维酸性蛋白抗体，均购自CHEMICON公司;P购自云南云科药业有限公司。 PD大鼠模型的制备 选择健康成年雄性SD大鼠，以10%水合氯醛(3～4 ml/kg)腹腔注射麻醉后，固定于脑立体定向仪上，按Sauer〔4〕和Lee等〔5〕的方法，确定大鼠右侧中脑被盖腹侧区的注射座标为：前囟后 mm，中线右侧旁开 mm，硬膜下 mm。颅骨钻孔暴露硬脑膜后，经微量注射器向该点注入5 μl(6 μg/μl)6羟基多巴胺。术后3、4 w腹腔注射阿朴吗啡( mg/kg)，诱发大鼠向健侧的单向旋转行为，计数30 min，以两次旋转圈数均7次/min的大鼠作为成功PD大鼠模型，两次旋转圈数求平均值，作为移植前的旋转圈数。 神经干细胞的分离、培养、传代及诱导向多巴胺能神经元分化 将孕14～15 d的SD大鼠脱颈处死，无菌条件下剖腹取出胚胎，解剖显微镜下分离中脑腹侧脑组织，加入 g/L胰蛋白酶室温消化20 min，离心弃上清后加入含B27(20 g/L)、EGF(20 μg/L)、bFGF(20 μg/L)、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的DMEM/F12无血清培养液，玻璃吸管轻柔吹打分散细胞，100目滤网过滤制成单细胞悬液。台盼蓝染色活细胞计数，调整细胞浓度为5×108个/L，接种入25 ml培养瓶内，每瓶量约5 ml。培养瓶置入CO2恒温培养箱(5%CO2、95%O2、37℃)内培养。每3～4 d半量换液1次，7～10 d传代1次。神经干细胞诱导向多巴胺能神经元分化及其免疫细胞化学鉴定和流式细胞仪检测见参考文献〔6〕 移植手术 PD大鼠随机分为多巴胺能神经元组、多巴胺能神经元+P组、P组及手术对照组，每组各8只，以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，固定于脑立体定向仪上，采用两点移植法，定位于大鼠毁损同侧纹状体的座标为：第一点：前囟前 mm，中线右侧旁开 mm，硬膜下 mm;第二点：前囟前0 mm，中线右侧旁开 mm，硬膜下 mm。颅骨钻孔暴露硬脑膜后，经微量注射器向坐标点注入移植物。多巴胺能神经元组向每一坐标点注入3 μl(1×105个/μl)神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元细胞悬液;多巴胺能神经元+P组注