3.2基因工程的基本操作程序课件--高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 ;抗虫棉 1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种有100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。;Bt抗虫蛋白毒性机理; 第一步：目的基因的筛选与获取 3．利用PCR获取和扩增目的基因 ⑴PCR概念 即聚合酶链式反应，它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。 ⑵ PCR反应条件 ①反应环境：缓冲溶液，提供合适的酸碱度和某些离子（如Mg2+）。 ②DNA母链：含目的基因，提供DNA复制的模板。 ③引物：2种，使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸，是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。 ④原料：四种脱氧核苷酸。 ⑤酶：耐高温的DNA聚合酶，如Taq酶。注：PCR中解旋用高温代替。; 第一步：目的基因的筛选与获取 3．利用PCR获取和扩增目的基因 ⑶PCR获取和扩增目的基因的过程 PCR每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步： 变性（90℃以上）使DNA双链解旋 ↓冷却 复性（50℃左右）引物与模板链结合 ↓加热 延伸（72℃左右）DNA新链由5′端向3′端延伸 上述过程可以在PCR扩增仪（PCR仪）中自动完成。 ⑷目的基因的鉴定 常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物。; 第一步：目的基因的筛选与获取 /////////用PCR可以扩增mRNA吗？///////// mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。由mRNA逆转录形成cDNA的过程是：第一步，逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子；第二步，核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA；第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子，如下图所示。; 第二步：基因表达载体的构建 1．构建基因表达载体的目的 让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2．基因表达载体的组成; 第二步：基因表达载体的构建 3．基因表达载体的构建; 第三步：将目的基因导入受体细胞 构建好的基因表达载体需要通过一定的方式才能进入受体细胞。 1．花粉管通道法——我国科学家独创 方法一：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中。 方法二：也可以在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。; 第三步：将目的基因导入受体细胞 2．农杆菌转化法 ⑴转化的概念 指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 ⑵适用的生物 主要是双子叶植物和裸子植物。 ⑶原理 ; 第四步：目的基因的检测与鉴定 目的基因进入受体细胞，是否稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。 1．分子水平的检测 ⑴利用PCR等技术检测转基因生物的DNA中是否插入了目的基因。 ⑵利用PCR等技术检测转基因生物的DNA中的目的基因是否转录出了mRNA。 ⑶利用抗原－抗体杂交技术检测目的基因是否翻译出了蛋白质。 2．个体生物学水平的鉴定 对转基因生物进行抗性接种实验，检测其是否具有抗性及抗性程度；或比较基因工程产品与天然产品的功能活性是否相同。;小结：基因工程的基本操作流程图; 阅读教材P77、P82页相关内容，分析基因工程基本操作中获取目的基因的方法、将目的基因导入受体细胞的方法。 1．获取目的基因的方法 ⑴利用DNA合成仪人工合成目的基因的方法适合长度较小的基因。 ⑵利用PCR获取和扩增目的基因的方法，既可以扩增已得到的基因或DNA片段，也可以用来扩增很长的DNA分子中的目的基因。用该方法的前提是“要有一段已知目的基因的核苷酸序列”，即要知道目的基因边界的碱基序列作为引物。 ⑶通过构建基因文库来获取目的基因，基因文库包括基因组文库（包含了一种生物的所有基因）和cDNA文库（包含了一种生物的部分基因，其基因是通过“反转