基因工程的基本操作程序最终.pptVIP

1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 第二十四页，共四十八页。 ③过程： ④优点:比较经济和有效 第二十五页，共四十八页。 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 第二十六页，共四十八页。 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵）显微注射 受精卵 新性状动物胚胎早期培养 第二十七页，共四十八页。 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法：感受态细胞法（Ca2+处理法） 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 第二十八页，共四十八页。 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 第二十九页，共四十八页。 （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 第三十页，共四十八页。 归纳步骤 第三十一页，共四十八页。 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 P15思考与探究 第三十二页，共四十八页。 4、个体生物学水平鉴定 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 第三十三页，共四十八页。 归纳步骤 第三十四页，共四十八页。 1-2：基因工程的基本操作程序 专题1：基因工程 第一页，共四十八页。 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质 ：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质 编码区 非编码区 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列： 启动子、 一段有特殊结构的DNA片断，基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录——启动子 终止子 一段有特殊结构的DNA片断，基因的尾端，使转录终止——终止子 第二页，共四十八页。 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 编码区 非编码区 能编码蛋白质的序列 非编码序列： 包括非编码区和内含子 不能编码蛋白质的序列 内含子： 外显子： ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列： 启动子、 终止子 第三页，共四十八页。 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 第四页，共四十八页。 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 第五页，共四十八页。 一、目的基因的获取 主要是编码蛋白质的结构基因 基因工程基本操作的步骤 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 二、获取目的基因的常用方法有哪些? （一）从基因文库中获取 （二）利用PCR技术扩增 （三）人工合成 第六页，共四十八页。 （一）从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 　　　1、分类 基因文库 （gene library） 基因组文库 部分基因文库（如cDNA文