堆肥中高效纤维素降解菌的筛选与鉴定（农学毕业论文资料）.docVIP

堆肥中高效纤维素降解菌的筛选与鉴定（农学毕业论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“建筑或环境”中“环保行业”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文8325字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：堆肥中高效纤维素降解菌的筛选与鉴定 1 文2：农村污水处理用高效絮凝菌株的筛选与鉴定 7 1 材料和方法 8 2 结果与分析 11 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 堆肥中高效纤维素降解菌的筛选与鉴定（农学毕业论文资料） 文1：堆肥中高效纤维素降解菌的筛选与鉴定 DOI:/-.013 收稿日期：２０１５－０５－１４ 基金项目：邯郸市科技计划项目（－４）；邯郸学院校内委托项目（１４３０１） 作者简介：李丹花（１９８２－），女，河南平顶山人，讲师，博士，主要从事微生物学研究，（电话）（电子信箱）ｙｄ＿ｌｄｈ＠１６３．ｃｏｍ。 当前，农村环境污染日趋严重，尤其是农村生活垃圾、畜禽养殖废弃物及农作物秸秆等主要农村固体废弃物已成为污染农村环境的主要因素，影响着农村建设的进程。堆肥化处理技术是解决农村固体废弃物问题的一个重要途径，是目前使废弃物无害化、减量化和资源化的关键技术［１］。在高纤维含量的堆肥或者添加秸秆、木屑等调节剂［２］的堆肥处理中，其成分和结构复杂，难以被大多数微生物直接作为碳源物质而转化利用，已成为缩短堆肥周期、提高堆肥效率的限制性因素，因此，纤维素的生物降解成为堆肥技术处理有机固体废弃物的关键，一些研究者就堆肥纤维素分解菌进行了研究，筛选出很多高效的降解菌株［３，４］ 有研究表明，在堆肥过程中强化接种高效微生物菌株可以增加堆体中的微生物数量，利用微生物菌群间的相互协同作用促进堆肥材料的腐熟，提高堆肥效率，但是由于堆肥物料成分复杂，接种外源微生物菌株与堆肥土著微生物之间有时也存在竞争，致使二者均不能充分发挥其作用［５，６］。因此，如能将土著菌的高效菌株强化接种到堆肥中，将能更好地发挥微生物菌剂的作用，加快固体废弃物中有机物的分解，提高堆肥腐熟度。 本研究从邯郸地区堆肥中筛选到一株降解纤维素的高效土著菌，并对其进行分子鉴定，初步研究其生长特性，旨在为堆肥提供优良纤维素分解菌株，加快堆肥中纤维素的分解，以进一步优化堆肥进程。同时也为构建土著菌组成的高效微生物菌剂奠定基础［７］ １ 材料与方法 １．１ 样品的采集和处理 猪粪堆肥样品采自邯郸市种猪场常年堆肥车间。取腐熟堆肥发酵物带回实验室。取腐熟发酵物１ ｇ放入无菌锥形瓶中，加入９ ｍＬ蒸馏水稀释至 g/mL，加入玻璃珠振荡培养１ ｈ备用。 １．２ 培养基配方 羧甲基纤维素钠培养基组分为：ＣＭＣ－Ｎａ １０．００ ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １．００ ｇ、ＮａＣｌ ０．１０ ｇ、ＭｇＳＯ４ ·７Ｈ２Ｏ ０．３０ ｇ、ＮａＮＯ３ ２．５０ ｇ、ＦｅＣｌ３ ０．０１ ｇ、ＣａＣｌ２ ０．１０ ｇ、琼脂 １８．００ ｇ、蒸馏水１ Ｌ；刚果红纤维素琼脂培养基组分为：ＣＭＣ－Ｎａ １０．００ ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １．００ ｇ、ＮａＣｌ ０．１０ ｇ、ＭｇＳＯ４ ·７Ｈ２Ｏ ０．３０ ｇ、ＮａＮＯ３ ２．５０ ｇ、ＦｅＣｌ３ ０．０１ｇ 、ＣａＣｌ２ ０．１０ ｇ、刚果红 ０．２０ ｇ、琼脂 １８．００ ｇ、蒸馏水１ Ｌ；ＬＢ培养基组分：蛋白胨１０ ｇ，酵母提取物５ ｇ，ＮａＣｌ １０ ｇ，琼脂１５ ｇ，蒸馏水１ Ｌ，ｐＨ ７．０。所有培养基于１２１ ℃下灭菌３０ ｍｉｎ备用。 １．３ 菌种的分离纯化 发酵物菌液按照梯度稀释法稀释，取稀释度为１０－２～１０－５的悬浊液２００ μＬ分别涂布于羧甲基纤维素钠分离培养基中培养，培养物放入２８ ℃恒温箱培养，将长出的菌落接种至ＬＢ培养基上进行划线纯化。 １．４ 分解纤维素能力鉴定 将纯化好的菌株点接到刚果红纤维素琼脂培养基上，２８ ℃恒温箱培养５ ｄ，量取透明圈直径（Ｄ）和菌圈直径（ｄ），并计算出比值HC（D/d），从而判定菌株的纤维素分解能力。 １．５ 菌株的分子鉴定 用细菌ＤＮＡ提取试剂盒（北京索莱宝科技有限公司）提取细菌基因组ＤＮＡ，以基因组ＤＮＡ为模板，２７Ｆ和１ ４９２Ｒ为１６Ｓ ｒＤＮＡ引物进行分子鉴定。ＰＣＲ产物琼脂糖凝胶回收试剂盒（北京索莱宝科技有限公司）回收大约１．５ ｋｂ的目的条带，连接到ｐＧＭ－Ｔ载体（北京索莱宝科技有限公司）上，转化至Ｅ． ｃｏｌｉ ＤＨ５α感受态细胞中，将阳性重组子送北京擎科新业生物技术有限公司测序。将测定得到的１６Ｓ ｒＤＮＡ序列通过ＢＬＡＳＴ软件与ＧｅｎＢａｎｋ中相关序列进行比对，并利用ＭＥＧＡ ５．