辣椒疫病生防菌的筛选鉴定及其抑菌机理初探（农学毕业论文资料）.docVIP

辣椒疫病生防菌的筛选鉴定及其抑菌机理初探（农学毕业论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“行业资料”中“畜牧”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文6072字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：辣椒疫病生防菌的筛选鉴定及其抑菌机理初探 1 文2：生物有机肥生防菌的应用研究进展 7 1 生防菌的应用研究 7 2 生防机制 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 辣椒疫病生防菌的筛选鉴定及其抑菌机理初探（农学毕业论文资料） 文1：辣椒疫病生防菌的筛选鉴定及其抑菌机理初探 DOI:/-.016 辣椒疫病由辣椒疫霉菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）引起，是重要的辣椒根茎病害之一，在中国及世界其他国家辣椒生产区发生严重，给辣椒生产造成巨大的经济损失。对于辣椒疫病的防治大多采用化学防治，而大量使用化学药剂导致了环境的严重污染，对消费者的身体健康产生了不利影响。目前，由于辣椒抗疫病品种较少，且多为中抗或不耐病品种，难以有效地控制辣椒疫病。因此，寻找安全有效的防治措施成为控制辣椒疫病的一个亟待解决的问题。 植物病害的生物防治是利用有益生物和生物代谢产物对植物病害进行有效防治的技术与方法，具有无毒、无害、无污染和高效等优点，受到了研究者的青睐。关于辣椒疫病的生物防治国内外均有相关研究报道［１－４］，但主要集中在生防菌的防效和应用上，对其控病机理研究却较少。在此基础上，针对湖北省辣椒疫病发生严重的状况，本研究从辣椒根际土壤中分离生防菌株，并对其进行鉴定，初步探讨生防菌的抑菌机理，为有效地防治辣椒疫病奠定基础。 １ 材料与方法 １．１ 供试菌株和培养基 辣椒疫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）、烟草黑胫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ ｖａｒ． ｎｉｃｏｔｉａｎａ）、棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）、棉花枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ． ｖｅｓｉｎｆｅｃｔｕｍ）、黄瓜立枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）均由长江大学生命科学院实验室保存。培养基为牛肉膏蛋白胨培养基（ＮＡ）、马铃薯葡萄糖培养基（ＰＤＡ） １．２ 土样采集和处理 从武汉、荆州、宜昌和荆门等辣椒种植区疫病发生严重的田地，利用五点采样法从生长健康辣椒根际采集土样。采样时铲去表层５ ｃｍ土层，取新鲜土样５００ ｇ，用保鲜袋保存。称取土样１０ ｇ加入装有９０ ｍＬ无菌水的三角瓶中（内装玻璃珠若干），３０ ℃、１２０ ｒ／ｍｉｎ振荡３０ ｍｉｎ，静置后获得土壤悬液。 １．３ 生防细菌的筛选 将土壤悬液稀释成１０－５、１０－６、１０－７浓度，吸取不同稀释度的土壤悬液１００ μＬ涂布于ＮＡ培养基上，置于２８ ℃培养４８ ｈ，挑取颜色、形态等不同的细菌单菌落并纯化、保存。采用平板对峙法测定分离到的细菌对辣椒疫霉的抑菌活性。将辣椒疫霉菌在ＰＤＡ平板上活化，用打孔器在菌落边缘打取菌块（直径６ ｍｍ），接种到ＰＤＡ平板中央。培养１ ｄ后，在距离辣椒疫霉菌块２ ｃｍ处的４个对接点接种待测细菌，２８ ℃培养，５ ｄ后观察抑菌结果，每个处理设３次重复。 １．４ 拮抗菌株的鉴定 将筛选到的抑菌效果较好的菌株进行菌落形态观察、显微形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、水解淀粉试验、甲基红试验（Ｍ．Ｒ）、Ｖ．Ｐ试验、柠檬酸盐试验、接触酶反应试验、明胶液化试验、运动性试验等主要形态和生理生化指标鉴定［５，６］。参照文献［７］方法提取疑似枯草芽孢杆菌基因组ＤＮＡ。根据已报道的枯草芽孢杆菌１６Ｓ ｒＤＮＡ的保守区序列设计引物ＢｓＦ（５′－ＴＧＣＡＣＡＣＡＣＣＧＣＣＣＧＴ－３′）和ＢｓＲ（５′－ＧＧＧＴＴＧＣＣＣＣＡＴＴＣＧ－３′），以枯草芽孢杆菌疑似株基因组为模板，进行ＰＣＲ扩增。ＰＣＲ反应程序为：９４ ℃预变性４ ｍｉｎ；９４ ℃变性１ ｍｉｎ，５４ ℃退火３０ ｓ，７２ ℃ 延伸１ ｍｉｎ，共３０个循环；最后７２ ℃延伸１０ ｍｉｎ。ＰＣＲ产物经试剂盒纯化后测序，将测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的序列进行对比分析，利用ＭＥＧＡ４．１软件构建进化树。 １．５ 拮抗菌株的抑菌谱试验 拮抗菌对各试验病原真菌的拮抗作用均采用平板对峙法，各试验重复３次。２８ ℃下培养５ ｄ后，测量抑菌带的宽度和菌落半径，计算拮抗菌对病原真菌生长的抑制率。对病菌生长的抑制率＝（对照菌落半径－处理菌落半径）／对照菌落半径×１００％ １．６ 拮抗菌株对辣椒疫病菌菌丝形态的影响 将辣椒疫病菌在ＰＤＡ培养基上接种培养３ ｄ后，用打孔器打取直