水质综合毒性的测定现场快速监测发光细菌法（试行）.docxVIP

PAGE iii 水质 综合毒性的测定 现场快速监测发光细菌法（试行） 二〇二〇年七月目次 TOC \o 1-1 \h \z \u 前言 iii 1 适用范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 方法原理 1 5 干扰和消除 2 6 试剂和材料 2 7 仪器和设备 3 8 样品采集和处理 3 9 分析步骤 3 10 结果计算与表示 4 11 精密度 5 12 质量保证和质量控制 6 前言 为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水质综合毒性现场快速监测方法，制定本方法。 本方法规定了地表水、地下水、生活污水和工业废水中综合毒性的现场快速监测发光细菌法。 本方法由中国环境监测总站组织制订。 本方法起草单位：中国科学院生态环境研究中心。 本方法验证单位：湖南省生态环境监测中心、云南省环境监测中心站、河南省生态环境监测中心、河北省生态环境监测中心、湖南力合检测技术服务有限公司、湖南长沙生态环境监测中心。 本方法主要起草人：李红岩、张艳芬、于志勇、马梅、饶凯锋、张琳琳、刘勇、吴洁、丁雄。 本方法由中国环境监测总站解释。 PAGE 3 水质 综合毒性的测定 现场快速监测发光细菌法（试行） 1 适用范围 本方法规定了测定水质综合毒性的现场快速监测发光细菌法。 本方法适用于对地表水、地下水、生活污水和工业废水综合毒性的快速测定。 2 规范性引用文件 本方法引用了下列文件或其中的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 ISO 11348-3 水质检测-水样对费氏弧菌发光的抑制效应的测定 ISO 5667-16 水质-样品的生物测试指南 GB/T 15441 水质急性毒性的测定发光细菌法 SN/T 5103 国境口岸饮用水生物毒性发光细菌检测方法 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ/T 91.1 污水监测技术规范 HJ/T 164 地下水环境监测技术规范 HJ 589 突发环境事件应急监测技术规范 3 术语和定义 3.1 发光细菌luminescent bacteria 发光细菌是一类非致病的革兰氏兼性厌氧微生物，在适当条件下能发射出肉眼可见的蓝绿色光，且发光强度与其接触的毒物浓度在一定的浓度范围内有对应关系。常用的菌种有明亮发光杆菌、费氏弧菌等。 3.2 相对发光强度 relative luminous intensity 加入样品的受试发光细菌发光强度与对照发光强度的比值，单位为%。 3.3 抑制率 inhibition rate 加入样品的受试发光细菌发光强度相对于对照发光强度的衰减百分比，数值上等于“1-相对发光强度”，单位为%。本方法使用抑制率表征毒性。 4 方法原理 利用发光细菌（明亮发光杆菌、费氏弧菌等）与样品有毒物质接触反应一定的时间后，可影响或干扰细菌的新陈代谢，使细菌的发光强度下降，其对发光强度的抑制程度与所受有毒有害物质的毒性及浓度有对应关系，光强度的变化可以用生物发光检测仪检测。 5 干扰和消除 5.1挥发性物质、与稀释水反应的物质或者测试过程中状态发生改变的物质，可能会影响测试结果或者导致重复性结果差异增大。对于含不可溶解、微溶物质的样品或者悬浮溶液，通过离心或者过滤去除干扰。 5.2由于光吸收或者光散射导致的光损失可能在高色度或者混浊溶液中发生，浊度较高的样品应该进行1个小时的沉淀处理。本方法只能测定包括色度影响在内的综合毒性。 5.3因为生物发光需要溶解氧浓度大于0.5mg/L，高需氧量或低溶解氧浓度的样品可能导致溶解氧不足，并产生抑制作用。因此，本方法只能测定包括溶解氧影响在内的综合毒性。 5.4易于生物降解的有机营养物质污染会导致生物发光的减弱或升高。因此，本方法只能测定包括有机营养物质在内的综合毒性。 5.5经消毒处理的生活污水或饮用水中含有余氯，余氯对发光细菌杀灭作用明显，因此在测定不包含氯影响的毒性效应时，应通过加入浓度为0.8mg/L的硫代硫酸钠除氯后再测定毒性。 5.6在初始样品中，加上实验中需要加入的盐之后，含盐浓度超过30g/L氯化钠或者形成同样渗透压的其他成分，会导致高渗透压。为避免此类干扰，调节渗透压后的样品不应该超过相当于35g/L氯化钠的渗透压。 5.7对于抑制率较高的高毒或剧毒样品，可进行稀释后再次测定其毒性，并记录和报告其稀释倍数和稀释后毒性。 6 试剂和材料 6.1发光细菌 费氏弧菌冻干粉或者明亮发光杆菌冻干粉，毒性测量所用细菌悬浮物来自商业化冻干细菌，可在-20℃储存。细菌在