蛋白质的生物合成 (3).pptVIP

氨酰-tRNA合成酶特点 对氨基酸有极高的专一性，每种氨基酸都有专一的酶，只作用于L-氨基酸，不作用于D-氨基酸 对tRNA具有极高专一性 具有校对功能：氨酰-tRNA合成酶的水解部位可以水解错误活化的氨基酸 活化一个氨基酸消耗2分子ATP 第62页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 N-甲酰甲硫氨酰-tRNAiMet的形成 Met-tRNAiMet fMet-tRNAtMet N10-CHO-FH4 FH4 转甲酰酶 CHO-HN-CH-COO-tRNA CH2 CH2 S COO- +H2N-CH-COO-tRNA CH2 CH2 S COO- 第63页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 肽链合成起始 识别mRNA的起始密码子为AUG，AUG对应的氨基酸为Met。 有两种甲硫氨酸专一性的tRNA： tRNAiMet—只与起始密码子结合 tRNAMet—只与肽链内部的AUG有关 在原核生物中，多肽链起始的氨基酸均为甲酰甲硫氨酸。 第64页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 原核生物肽链合成的起始 30S亚基? mRNA IF3- IF1复合物 30S? mRNA ? GTP- fMet –tRNA- IF2- IF1复合物 70S起始复合物 codon anticodon A位 P位 mRNA +30S亚基-IF3 IF2-GTP-fMet-tRNA IF3 50S亚基 IF2+ IF1+GDP+Pi IF1 A位 IF-3 5? 3? IF2 GTP P位 IF3 IF2 IF1 IF-1 70S起始复合物 第65页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 起始因子 在翻译的起始阶段，还需有3种蛋白质因子 —— 起始因子(IF)的参与，即IF1、IF2、IF3。 IF1 IF2 　 IF3 辅助IF3 有GTP酶活性 特异识别fmet-tRNAimet 形成fmet-tRNAimet- IF2-GTP 促进30S小亚基结合mRNA 终止时：促使核糖体解离 第66页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 三元复合物(trimer complex)的形成 核糖体30S小亚基附着于mRNA的起始信号部位，该结合反应是由起始因子3(IF3)介导的，另外有Mg2+的参与。故形成IF3-30S亚基-mRNA三元复合物 氨基酸羧基通过酸酐键与AMP上的5?-磷酸基相连 酶：氢键 第67页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 30S前起始复合物(30S pre-initiation complex) 形成 在起始因子2(IF2)的作用下，甲酰蛋氨酸-起始型tRNA(fMet-tRNAMet)与mRNA分子中的起始密码子(AUG或GUG)相结合，即密码子与反密码子相互反应。同时IF3从三元复合物脱落，形成30S前起始复合物，即IF2-30S亚基-mRNA-fMet-tRNAMet复合物。此步亦需要GTP和Mg2+参与 第68页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 70S起始复合物(70S initiation complex)形成 50S亚基与上述的30S前起始复合物结合，同时IF2脱落，形成70S起始复合物，即30S亚基-mRNA-50S亚基-fMet-tRNAMet复合物。此时fMet-tRNAMet占据着50S亚基的肽酰位(peptidyl site，简称为P位或给位)，而50S的氨基酰位(aminoacyl site，简称为A位或受位)暂为空位 第69页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 起始复合物的结构 此时核糖体的P位被起始氨酰-tRNA占据，A位空着，等待能与第二个密码子匹配的氨酰-tRNA进位。 第70页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 S.D序列 原核生物-----S.D序列（核蛋白体结合位点，RBS） 第71页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 肽链延长 这一阶段是在fMet（或肽链）的C末端逐个的添加aa，使肽链不断延伸 每延伸一个aa，需要经历三步：1）进位2）转肽3）移位 第72页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 1 2 1 2 2 3 2 3 进位 肽键形成 移位 进位 (Tu\Ts) GTP GTP N-端 2 3 5′ 3′ C-端 肽键形成 1 5′ 3′ （EF-G） 肽链的延长 第73页，共113页，2022年，5月20日，7点50分，星期六 核蛋白体循环——进位 氨基酰-tRNA与结合因子EF-Tu-GTP结合，GTP水解释放能量推动氨基酰-tRN