分子生物实验课件：斑点杂交二.pptVIP

实验步骤 4. PCR扩增 ①按以下组成调制反应液 cDNA模板 5.0mL 目的引物（25umol/L） 2.0mL 脱氧核苷三磷酸 4.0mL PCR缓冲液（10×） 5.0mL MgCl2（25mmol/L） 3.0mL 双蒸水 补至49mL 以逆转录阴性对照取代cDNA模板作为PCR阴性对照，将上述反应成份加于0.5ml EP管，混匀，短暂离心。 ②扩增： 94 ℃ 5min，热循环条件： 94 ℃ 45s，56 ℃ 30s， 72 ℃ 30s，循环30次。最后72 ℃延伸5min。 PCR产物于4保存待用。 * 斑点杂交（二） 聚合酶链反应（PCR）扩增细胞因子mRNA，电泳鉴定 *