医学免疫学课件：第6章 放射免疫技术.pptVIP

简介 Radioimmunoassay，RIA； Immunoradiometric assay,IRMA 始创于1959年，Yalow和Berson用放射性核素标记胰岛素； 1968年Mile和Hale创立了IRMA。 将抗原抗体反应的特异性与同位素测定技术的敏感性相结合的一项标记免疫分析技术。 灵敏度高（达ng甚至pg水平），应用广泛。 开创了体液微量物质定量分析的崭新领域，并为其他标记免疫分析的建立和发展奠定了基础。 被标记物是抗原：高纯度；蛋白质抗原可直接标记，非蛋白质抗原或半抗原需修饰后再标记。 被标记物是抗体：高亲和力、高特异性、高效价、 高纯度。 四、放射性检测的防护 《放射卫生防护标准》 包括：实验室选址、布局、必要的防护器材、放射性废弃物的处理、放射性表面污物的去除、个人防护等。 1.125I 作为免疫分析标记物有哪些优势？ 2.制备125I标记物的基本原理是什么？有哪些方法？ 3.评价125I标记物质量的指标有哪些？ 4.放射免疫分析和免疫放射分析的测定原理各是什么？ 5.反应结束后，如何将免疫复合物与游离标记物分离开？ 6.放射免疫分析实验中，如何确定待测抗原的含量？ 7.免疫放射分析与放射免疫分析的反应原理有何不同？ 放射免疫技术的基本原理是放射性核素可探测的灵敏性、精确性与抗原抗体反应的特异性相结合，主要包括RIA和IRMA。放免分析常用的放射性核素是125I 。放射化学纯度、比放射活性、免疫活性是评价标记物的重要指标。 RIA以标记抗原为特点，属于竞争性免疫分析，基于标记抗原和非标记抗原对同一抗体有相同亲和力；常采用PEG-双抗体法对B或F进行分离；RIA多用于小分子半抗原的测定。 IRMA以标记抗体为特点，属于非竞争性免疫分析，以过量125I标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应，采用固相免疫吸附方式对B或F进行分离； IRMA以双位点法最为常用，适用于大分子蛋白质检测。 第三节 免疫放射分析(IRMA) 一、免疫放射分析(IRMA)－基本原理 以过量125I标记抗体与待测抗原进行非竞争 性免疫结合反应, 用固相免疫吸附剂对B或F 进行分离，其灵敏度和可测范围均优于RIA， 操作也较RIA简单。 免疫放射分析(IRMA) Immunoradiometric assay, IRMA. 从放免分析的基础上发展起来的. 特点是用核素标记抗体直接结合受检 标本中抗原的非竞争性免疫结合反应. 通过固相免疫吸附剂作为B或F的分离 手段. 免疫放射分析(IRMA) 属固相免疫标记测定,原理与ELISA极为相似. IRMA主要是标记物是核素及最后检测是放射 性量. ELISA的标记物是酶, 酶催化底物生成有色 产物,根据颜色反应程度定性或定量. 无论单、双位点的IRMA,放射性量均与受检 抗原量呈正比. 单位点 IRMA 先用过量标记抗体与 待测抗原进行反应，形成 抗原抗体复合物；用固相 抗原结合未结合的标记抗体 并将其分离, 测定上清液 的放射量 双位点 IRMA 先用固相抗体与抗原结 合，再用过量的标记 抗体与抗原的另一决定 簇结合，形成固相抗体- 抗原-标记抗体复合物， 洗弃剩余标记抗体，测固相上放射性。 二、分离技术和数据处理 分离结合、游离标记物 固相分离法 将抗体或抗原结合在固相载体（如聚苯乙烯）上，利用固相抗体或抗原分离B和F，简便、快速、适用于自动化分析。 固相分离技术的重点是包被，在聚苯乙烯吸附预包被的抗体或抗原后，需用牛血清白蛋白封闭聚苯乙烯材料上未结合抗体或抗原的空白位点， 防止在以后反应中发生非特异性吸附。 数据处理 用系列标准品绘制标准剂量反应曲线，将待测样品进行同样操作，可从剂量反应曲线查得待测样品浓度。 在绘制剂量反应曲线时以获得较好的相关系数（绝对值接近1）为标准。 三、 RIA与IRMA的比较 放射免疫分析RIA 以放射性核素标记 抗原与反应系统中 未标记抗原竞争结 合特异性限量抗体 来测定待检样品中 抗原量，待测抗原 浓度与检测的信号 强度成反比。 （特异性抗体限量） 免疫放射分析IRMA 以过量标记抗体与 抗原非竞争结合， 采用固相免疫吸附 载体分离游离和结 合标记抗体，待测 抗原浓度与检测的 信号强度成正比。 （标记抗体过量） IRMA与RIA比较 可靠性：是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同，借助标准曲 线与样品稀释曲线是否平行来判断方法的可靠性。 剂量-反应曲线：针对不同的标记免疫反应类型选择适合的数学模型