临床生物化学：第21章 临床生化检验方法与试剂盒评价.pptVIP

第*页 （六）提高试剂盒稳定性的措施 酶法试剂盒稳定性主要取决于酶或辅酶的稳定和底物的稳定。 稳定的措施 防腐剂（抑制细菌生长） 蛋白稳定剂（防止水化、聚合） 蛋白酶抑制剂（防止蛋白酶的水解） 巯基酶保护剂（防止巯基氧化 缓冲体系 第*页 小 结 方法学的性能分为可靠性和实用性两类。可靠性主要包括正确度和精密度。评价正确度的方法有回收试验、干扰试验、对比试验，方法的线性试验和最低检测限。精密度评价主要采用重复性试验。 第*页 小 结 不同实验室之间结果互认是医学检验追求的最终目标。其前提是实验室之间的检测系统的比对。方法统一、校准品统一是可比性的关键。 试剂盒已经在自动生化分析仪上广泛使用， 把握试剂盒的发展趋势，有助于试剂盒的研发思路的形成，其核心是试剂盒的稳定技术。 Thank you * * * * * * 第*页 回收试验 干扰试验 线性试验 重复性试验 对比试验 检测限与检测范围 批内 批间 日内 日间 总不精密度 三 方法学评价实验 准确度 第*页 （一）重复性试验 1.试验样品 一般选择2个，一个在参考区间附近，另一个为异常值 2.初步的批内精密度评价：即一个样品重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数。 用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h，每批平行测定2份，至少共测定20天，80个数据。 每对结果间的差（共40个）代表批内差；2批均值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结果的均值（共20个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。 第*页 （二）回收试验 所谓回收即评定方法正确测定加入常规样品中的纯分析物的能力。 即在未知浓度的常规样品中加入一定量的待测组分，检测加入前后该组分的增加量，实际增加量与理论加入量的比值就是回收率。 目的是测定比例系统误差 。 第*页 3. 回收率计算 加入浓度= 标准液浓度 回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度 回收率（%）= 一般要求回收率95-105% 第*页 （三）干扰试验 干扰是指在测定某分析物时，受其他非分析物的影响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）。根据干扰的产生原因分为：基质效应、非特异反应、外部干扰物等。 干扰试验的设计同回收试验，即将不同浓度的干扰物代替纯标准品。一般规定只对胆红素、血红蛋白、脂类做干扰试验。 干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值 第*页 （四）线性试验 线性试验用来评价剂量和反应之间的线性关系，并把呈直线部分确定为线性范围（linear range）。线性范围指检测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。 1.样品浓度 线性评价至少应有5个不同浓度，可选择低值和高值样品各一份，低值样品和高值样品分别按体积3：1混匀、等份混匀、1:3 混匀，形成5个不同浓度。 2..试验方法 将不同浓度的样品（X），随机排列，每个样品重复测定4次（Y），并要求在当天完成所有分析。 第*页 浓度范围应以分析项目的线性要求为准。 线性评价应有5个不同浓度，可选择低值和高值标本各一个，低值标本为1号，高值标本为5号，二者3:1混匀为2号，等份混匀为3号，1:3混匀为4号，2-4号标本的浓度按下式计算： C2 = 3/4C1 +1/4C5 C3 = 1/2C1 +1/2C5 C4 = 1/4C1 +3/4C5 第*页 绘图 在坐标图纸上绘制X-Y（浓度-吸光度）关系图，观察线性关系。 线性拟合 ①直线拟合方程为Y=b0+b1X； ②抛物线反应曲线的拟合方程为Y= b0+b1X+b2X2； ③“S”形反应曲线拟合方程为Y= b0+b1X+ b2X2+b3X3 数据整理与离群点检查 线性失拟误差检查或非线性度计算 第*页 （五）对比试验 对比试验是指分别用两种方法测定一组不同浓度和病理情况的临床样品，测定结果进行回归分析。 比较方法应选择参考方法或公认的常规方法，测定偏差主要来源于评价方法。 1.试验样品 应收集新鲜的正常和异常的临床样品，应有足够宽的浓度范围，各浓度样品数量应有合适的比例。 2.样品测定 样品数至少为40个，每个样品用2种方法分别作双份测定。每天测定8个样品，双份测定时第一次按顺序1，2……7，8，第二次8，7……2，1，共测试5天。 第*页 （六）检测限 检测低限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小量。方法是做空白平行试验（一般20次），以蒸馏水调零，读取各次吸光度，计算均