临床生物化学：第22章 化学法测定生物化学物质.pptVIP

第*页 方法学评价 优点： 是目前测定未饱和铁结合力的常规方法，线性可达107.4μmol/L； 缺点：避免外源性铁污染，标本收集后应立即测定。 第*页 （二）血清铜和尿铜测定 1．测定方法概述 AAS法：是血清铜测定的首选方法，国外大部分实验室采用ASS法。 分光光度法：在一定的解离体系下使Cu2+从其结合蛋白上裂解出来，然后利用不同的显色体系显色测定。 第*页 双环己酮草酰二腙比色法测定原理： Cu 稀HCl + Cu protein protein 三氯醋酸 Cu (蛋白滤液) 双环己酮草酰二腙 稳定的蓝色络合物 　620 nm 测定原理 2．双环己酮草酰二腙比色法测定铜 第*页 方法学评价 优点：是《全国临床检验操作规程》中的推荐方法，线性范围达62.8μmol/L。特异性较高，据报告23种阳离子与19种阴离子对双环己酮草酰二腙比色法没有干扰。 缺点：灵敏度低，操作步骤繁锁，不宜自动化分析。 第*页 AAS 法 灵敏、准确，但仪器昂贵 双环己酮草酰二腙比色法 选择性较好，灵敏度低， 需去蛋白质，不宜自动化。 5-Br-PADAP法 可自动化，灵敏度较高。 （2-[5-溴-吡啶偶氮]-5-二乙氨基酚） 方法学评价 第*页 （三）血清锌和尿锌测定 1．测定方法概述 测定方法有：AAS法、中子活化法、阳极溶出伏安法、酶法、比色法、荧光光度法等。 酶法：已取得较大进展，有碳酸酐酶酶法和碱性磷酸酶酶法等。 比色法：目前仍是血清锌测定的常用方法。 第*页 测定原理 2．5-Br-PADAP测定血清锌 Fe3+及Cu2+被抗坏血酸还原成低价，和其他金属离子一起被氰化物络合而掩蔽。水合氯醛能选择性地释放锌，使锌与5-Br-PADAP反应生成红色复合物，在550nm处比色测定。 第*页 方法学评价 优点：是测定血清锌的常用方法，适宜高水平锌的测定，线性达80μmol/L。 缺点：5-Br-PADAP可与多种离子发生灵敏的显色反应；干扰因素多。 避免溶血，且采血后立即分离，因血小板裂解释放的锌使检测结果偏高。 第*页 第四节 激素代谢产物测定 一、尿香草扁桃酸的测定 二、尿17-羟皮质类固醇的测定 三、尿17-酮类固醇的测定 第*页 一、尿香草扁桃酸的测定 （一）测定方法概述 尿液中VMA含量测定可以间接反映体内肾上腺髓质激素的浓度水平，是临床诊断嗜铬细胞瘤的重要指标。 多采用比色法：香草醛直接显色法和重氮化对硝基苯胺显色法。 第*页 测定原理 （二）重氮化对硝基苯胺显色法测定 用乙酸乙酯提取酸化尿液中VMA，再用碳酸钾将VMA从乙酸乙酯中分离提出，利用重氮化对硝基苯胺与VMA生成偶氮复合物，再用氯仿抽取，然后用氢氧化钠水溶液萃取，水溶液显粉红色可进行比色。与标准液同样处理比色，可求其含量。 第*页 方法学评价 优点：重氮化对硝基苯胺显色法测定VMA是我国卫生部临床检验中心推荐的常规方法。 缺点：测定结果较其它法略高。水杨酸盐、咖啡因、非那西丁等药物有干扰。 第*页 17-OHCS为肾上腺皮质所分泌的糖皮质激素及其代谢产物，尿中24h排出量可反应肾上腺皮质的分泌功能。 化学法常用苯肼比色法测定。 二、尿17-羟皮质类固醇的测定 （一）测定方法概述 第*页 测定原理 （二）苯肼比色法测定 用56%硫酸调节尿液pH 1，再用10:1氯仿-正丁醇混合液将尿中结合型或游离型17-OHCS自尿中提取。加入盐酸苯肼和硫酸，生成黄色苯肼衍生物-----Porter-Silber反应 在410nm处比色测定。 第*页 方法学评价 优点：是我国推荐使用Porter-Silber比色法，所需条件简单。 缺点：特异性较差，受泼尼松、地塞米松等药物及植物色素、有色饮料影响。 第*页 三、尿17-酮类固醇的测定 （一）测定方法概述 17-KS是肾上腺皮质激素及雄性激素的代谢产物，其测定反映了肾上腺皮质和睾丸两者的功能，特异性较低。 实验室多采用间二硝基苯比色法进行检测。 第*页 （1）酸性条件下水解脱酯 （2）间二硝基苯中间反应产物的生成 （3）zimmermann反应，紫红色化合物于520nm处有吸收峰 测定原理 （二）间二硝基苯比色法测定 第*页 方法学评价 优点：zimmermann反应是我国卫生部临床检验中心推荐的方法。 缺点：不够灵敏，且操作较费时，带色素的药物对检测结果有干扰，目前大多有条件的实验室已经直接测定单个酮类固醇。 第*页 小 结 化学比色法多采用平衡法测定方式，以其成本低廉、呈色产物稳定