临床生物化学：第29章 免疫化学法测定生物化学物质.pptVIP

第六节 临床药物浓度监测 一、免疫化学法测定药物的方法特点 优点：灵敏度高，样品用量少、不需预处理，操作简便，可自动化分析。 缺点：抗原特异性易受干扰 二、免疫化学法测定药物浓度的应用情况 1. 放射免疫法 2. 荧光免疫法 3. 酶免疫法 4. 化学发光免疫法 小 结 免疫化学技术，因具有高度特异性和高灵敏性而广泛应用于体液微量生物化学物质的测定，常用的免疫化学方法主要有化学发光免疫法、免疫比浊法、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验和放射免疫法等。 用免疫化学法测定的微量生化物质有：化学发光免疫法测定胰岛素、C肽、肌钙蛋白、总血清T4、AFP和前列腺特异性抗原；间接免疫荧光法测定胰岛自身抗体；免疫透射比浊法测定ApoAI或ApoB及LP（a）；乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白；电化学发光法测定利钠肽；时间分辨荧光免疫法测定促甲状腺素等方法，在临床已经或正在发挥着重要的作用。 * 免疫化学技术:从经典的抗原抗体反应（聚集和沉淀反应）发展到标记免疫学技术。 * 放免法：以核素标记的已知抗原和非标记的待测抗原与限量的特异性抗体竞争结合的方法。 免疫放射法：以核素标记的过量已知抗体与检测样品中待测抗原直接结合，然后用固相抗原分离游离标记抗体的方法。 * 根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的和游离的酶标记物，可分为均相和非均相两种类型。在均相法中结合的酶标记物中酶的活性被抑制，因此无需进行分离，通过对游离酶标记物的测定即可反应受检物质的量，如EMIT.在需要分离游离和结合的酶标记物的非均相法中，目前临床上最常用的分离方法为固相分离法，如ELISA. * 放射免疫法：当标记抗原、非标记抗原和特异性抗体三者同时存在于一个反应系统时，由于标记抗原和非标记抗原对特异性抗体具有相同的结合力，因此两者相互竞争结合特异性抗体。由于标记抗原与特异性抗体的量是固定的，故标记抗原抗体复合物形成的量就随着非标记抗原的量而改变。非标记抗原量增加，相应地结合较多的抗体，从而抑制标记抗原对抗体的结合，使标记抗原抗体复合物相应减少，游离的标记抗原相应增加，亦即抗原抗体复合物中的放射性强度与受检标本中抗原的浓度呈反比（图16-1）。若将抗原抗体复合物与游离标记抗原分开，分别测定其放射性强度，就可算性结合态的标记抗原（B）与游离态的标记抗原（F）的比值（B/F），或算出其结合率[B/(B＋F)]，这与标本中的抗量呈函数关系。用一系列不同剂量的标准抗原进行反应，计算相应的B/F，可以绘制出一条剂量反应曲线（图16-2）。受检标本在同样条件下进行测定，计算B/F值，即可在剂量反应曲线上查出标本中抗原的含量。 * 方法概述：方法有免疫比浊法、ELISA、火箭免疫电泳法和免疫扩散法等。ELISA法定量分析的精密度比其他免疫化学定量法比较 差，免疫比浊法是最常用的。 * 抗血清的纯度和效价：抗ApoAI 1:16~32；抗ApoB1:128 抗原抗体比例合适性：标本1:20预稀释，或者效价提高，抗ApoAI=1:32；抗ApoB=1:256. 校准血清定值：现在已有WHO认可的由美国西北脂类研究室根据国际临床化学会的计划研制的 ApoAI参考血清（ SP1-01） ApoB参考血清（SP3-07） 常规工作用校准血清应溯源于这两种参考血清 。 抗原位点的暴露：使用表面活性剂有助于抗原位点的暴露，还能减轻标本空白的浊度，如PEG6000。 * * Apo(a)多态性，与纤维蛋白溶酶原结构相似，准确度不好；颗粒大小不同的Apo(a),会产生不一致的光散射和光吸收，而且明显受标本中基质影响。 * 方法概述：早期的测定方法有分光光度法、电泳法、层析法、对流免疫法、红细胞凝集试验等。因灵敏度低、方法复杂、检测时间长而不适合实验室测定。放免法有放射性污染。现用较多的是乳胶增强免疫比浊法和化学发光免疫分析法。 * 方法概述：多采用免疫化学方法。胶体金层析法、ELISA法、乳胶增强透射比浊法、化学发光免疫法等。 * 方法概述：酶联免疫法、放免法、化学发光免疫法和荧光免疫法。 * 方法概述： * 化学发光免疫法、放免法、ELISA法等。 * 方法概述：放免法、化学发光、荧光免疫等。 * 方法概述：光谱法、免疫化学法和色谱法。由于药物含量低，多以ug/ml、ng/ml水平存在，且检测受结构相似的内源性物质干扰，还受结构相似的代谢产物干扰，故要求高灵敏度和高特异性的方法。HPLC和气相色谱法是药物浓度测定的参考方法和推荐方法，但不适用于临床。目前多采用免疫化学法。 第二十九章免疫化学法测定生物化学物质 掌握 激素、载脂蛋白及脂蛋白（a）、糖尿病相关激素及抗体等临床常用项目，免疫化学法测定的原理以及其方法的优缺点。 熟悉 肿瘤