临床生物化学检验实验：实验三回收试验与干扰试验.pptVIP

第*页 实验三 GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干扰试验 第*页 1.掌握GOD-POD法测定葡萄糖的原理 2.掌握回收及干扰试验的原理及目的 3.熟悉回收及干扰试验的设计原则及注意事项 4.了解回收及干扰试验的操作方法 实验目的 （一）GOD-POD法测葡萄糖原理 GOD 葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+H2O2 POD H2O2+酚+4-AAP H2O+醌亚胺（红色） 在500nm波长下测吸光度，吸光度大小与葡萄糖浓度成正比。 （一血糖测定原理 实验原理 第*页 实验原理 （二）回收试验 定义：分析某临床检测方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。 目的：是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。 方法：将不同浓度的被分析物的标准溶液加入到病人样品中，成为回收样品，而原样品加入相同量的无分析物的溶剂作为基础样品，用试验方法同时测定分析，两者之差即为回收浓度，回收浓度与加入浓度的百分率为回收率。合格的回收率应为100%±5%。 （三）干扰试验 目的：评价候选方法的准确度。是检测特异性和干扰二者所引起的误差。 方法：加入一定浓度的干扰物，形成恒定系统误差（误差的实际大小随干扰物浓度而异），并将其测定出来。既用于检测某方法的特异性，也用于检测干扰物质对方法的干扰作用。其方法与回收相似，不同的是所加入的是疑有干扰或非特异性反应物质，而不是标准液。 关于回收与干扰 回收率接近100％ 分析不受基质影响。即无论在纯溶液还是复杂的基质环境中，分析方法的反应能力是一样的。（准确度不受影响） 回收率明显偏离100％ 分析明显受不同的基质影响。在不同的基质环境下，分析方法的反应能力有明显差异。（准确度受影响） 干扰和特异性 特异性 如某些非分析物的化学性质与分析物接近，与试剂发生反应为特异性差（如ALT测定时游离酮酸的存在反应，TG测定中游离甘油）。 干扰 非分析物改变了被测定物和试剂间的反应，从旁影响了分析物被该方法检测的正确度，是谓干扰（如防腐剂、溶血、黄疸、脂浊影响了反应）。 回收实验设计原则 1.标准液 （1）要求高纯度标准品。 （2）加入的液体体积要小，一般不超过总体积的10％。 （3）浓度要比欲加的浓度至少高10倍。可直接加入固体标准品。 （4）回收样品一般制备高、中、低三个浓度水平。高浓度应低于线性范围的上限，加入被分析物浓度后最好使总被测物浓度在医学决定水平附近。 2.准确吸量。 3.一般重复测定2-3次取均值。 干扰试验设计原则 加入干扰物溶液的体积要小。但不如回收严格。 加入可疑干扰物的浓度须达到有价值的范围。有可能应达到病理标本的最高浓度值。 在确证有影响后应测定在何浓度时，产生的误差在临床上无意义，即确定使分析结果影响临床应用价值的最低可疑物浓度值。 干扰试验通常考虑胆红素、血红蛋白、脂浊、防腐剂、抗凝剂、药物等。 GOD-POD法测定GLU的试剂（R1 : R2 =3:1, 混匀使用。） 2. 55.56mmol/L（1000mg/dl）的葡萄糖标准液（回收试验用） 3. 27.78mmol/L（500mg/dl）的葡萄糖标准液（回收试验用） 4. 葡萄糖校准液5.55mmol/L （500mg/dl）(标准管用) 5. 维生素C注射液5mg/ml（干扰试验用） 试剂与器材 （一）回收试验 1.回收样本制备 1、U0 基础样品：血清0.45ml + 0.05ml蒸馏水 2、 U1 回收样品Ⅰ：血清0.45ml＋0.05ml（1000mg/dl）的葡萄糖标准液 3、U2 回收样品Ⅱ：血清0.45ml＋0.05ml（500mg/dl）的葡萄糖标准液 4、U3 回收样品III：血清0.45ml＋0.025ml（500mg/dl）L的葡萄糖标准液＋ 0.025ml蒸馏水  步 骤 2.样本测定（每人一套） 混匀，37℃水浴10分钟，520nm波长，B管调吸光度零，计算各管浓度。 （二）干扰试验 1.干扰物维生素C浓度确定 通常维生素C最大注射用量为1g/天，假设其分布在5L血浆中，则血浓度为200mg/L，即0.2mg/ml，我们将最大干扰浓度大概定为0.5mg/ml。干扰浓度大概定为20g/L。2.干扰样品制备 U0 基础样品： 血清0.45ml + 0.05ml蒸馏水 U1 干扰样品Ⅰ：血清0.45ml＋0.05ml 10mg/ml维生素C溶 液? U2干扰样品Ⅱ： 血清0.45ml＋0.025ml 10mg/ml维生素C溶液＋ 0.025ml蒸馏水 U3 干扰样品Ⅲ：血清0.45ml