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实验三 淋巴细胞分离技术 （1）细胞免疫 主要是由T细胞介导。这种细胞在血液中占淋巴细胞总数的80％～90％。受抗原刺激后活化发挥直接杀伤、分泌细胞因子等效应。 2）体液免疫 主要是通过B细胞介导。受到抗原刺激形成浆细胞后，产生并分泌抗体即免疫球蛋白，发挥中和作用、激活补体及调理作用等。 淋巴细胞 为白细胞中体积最小的一种，直径6-8微米; 在人体约占白细胞的20-30%，圆形细胞核，细胞质很少。 淋巴细胞 一、实验目的 掌握淋巴细胞分离技术，熟悉免疫细胞的检查和功能 二、实验原理 脾脏是机体最大的外周免疫器官， 含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞。 本实验以小鼠脾为例，通过离心及红细胞裂解液等分离脾细胞悬液，得到较高浓度的淋巴细胞。 滤孔直径与滤网目数的对应关系 滤孔直径（mm） 目数（目） 0.771 20 0.420 40 0.180 80 0.152 100 0.125 120 0.105 150 0.089 180 0.074 200 0.053 270 0.044 325 扒开内脏，可看到如图所示的长约3-4厘米呈长条状的深红色组织，即为脾脏 三、试剂及器材 小鼠，解剖剪，培养皿，研磨棒，尼龙网，离心机，显微镜，计数板； RPMI 1640培养液， 红细胞裂解液（Tris-NH4Cl）， 0.05％锥兰PBS溶液。 四、实验步骤 1. 颈椎脱臼处死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2分钟； 2. 在超净台中小心剪开小鼠的腹部外皮，用大头针固定，再剪开小鼠的腹腔，用镊子取出小鼠脾脏放入200目尼龙网上,注意无菌操作； 3.加入2mL的1640培养液, 然后用注射器活塞轻轻研磨小鼠脾脏； 4. 加入2mL的1640培养液，冲洗尼龙网上残余细胞； 5. 将全部液体收集到离心管中，1500rpm离心10分钟,去上清； 6.加入2mL的1640培养液，1500rpm离心10分钟,去上清； 7. 加Tris 氯化铵2ml，1分钟消化红细胞，加入1640培养液6ml, 1500rpm离心10分钟； 8 .去上清液，加入1 mL的1640培养液重悬细胞，计数板细胞计数。 五、实验结果 细胞浓度计算公式： 4个大方格内的细胞总数 个/ml =－－－－－－－－－－－－ ×104×稀释倍数 4 细胞活力检测：死的细胞可被染成蓝色，活细胞不着色。计数200个淋巴细胞，计算出活细胞百分率。 活细胞百分率=活细胞数／总细胞数×100% 便于在体外对机体各种免疫细胞．分别作鉴定，计数或功能测定。 淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备，E花环试验，淋巴细胞转化试验，淋巴细胞培养（需无菌操作）。 * * 此时收集到的液体中包括哪些细胞？ * * 便于在体外对机体各种免疫细胞．分别作鉴定，计数或功能测定。 淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备，E花环试验，淋巴细胞转化试验，淋巴细胞培养（需无菌操作）。 * * 此时收集到的液体中包括哪些细胞？ * *
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