临床生物化学：第27章 生化分析仪自动分析.pptVIP

* * * * * * * * 后分光技术的光度计则是直接以光源灯所发出的混合光透过待测溶液，经溶液吸收后再用全息光栅对出射光进行分光，然后将纯度很高的不同波长的单色光折射到光电二极管矩阵上。由于位置不同，矩阵上的每一个光电二极管只能接收某个特定波长的单色光。其优点是：可同时选用双波长进行测定，大大降低了噪声；光路中无可动部分，无需移动仪器的任何部件。 * * * * 尽量选择待测物与干扰物吸收峰相差悬殊的波长做待测波长。NAD(P)+ 或NAD(P)H 是生物化学检验中常用的指示系统，选择其吸收峰340 nm为测定波长很合理，因为340 nm是 的第二吸收峰，而在此波长 的吸光度很低,如上左图。而有时有时主波长选择需要考虑多方面因素。例如，ALP底物对-硝基酚磷酸盐（4NPP）被ALP水解生成产物对-硝基苯酚（4NP），二者吸收光谱如上右图所示，IFCC在建立ALP推荐方法时选择了405nm为测定波长。 * * * * * * 第*页 1点校准：校准曲线呈直线且过坐标零点，1个浓度校准液 2点校准：校准曲线呈直线但不过零点，需2个浓度校准液 多点校准：校准曲线呈非线性，需3个以上浓度校准液 校准类型和校准液个数 校准参数包括： 校准类型和个数 校准液浓度 校准液名称和位置 C C A 校准曲线呈直线，只需单点校准K=Cs/As Cs As 第*页 多点校准：校准后可采用多种曲线方程拟合校准曲线 抛物线型采用logit（多元回归曲线）方式 线形不确定或呈S型，用splain（样条函数，平滑曲线）方式 免疫比浊法的校准曲线一般呈非线性 抛物线型 S型 第*页 （二）特殊分析参数　（蓝色字熟悉） 1. 试剂A及其变化的检查 2. 酶活性测定准确度监测 3. 校准检查 4. 前带检查 5. 样品信息监测 6. 样品预稀释 7. 线性范围和可报告范围 8. 参考范围　 9. 方法学补偿系数 不同仪器参数名 和设置方法不同 所有仪器均具备. 应用少 第*页 1. 试剂空白吸光度及其变化的检查 （1）试剂空白吸光度检查 是检查试剂质量的一个指标 每种试剂本身有一定吸光度（AB） 超出其设定范围时分析仪报警，提示试剂变质 ，例如 　　 ALP、GGT等色素原底物逐渐自身分解生成黄色产物.AB 用Trinder反应原理的试剂，酚类物质逐渐氧化为醌类产物.AB 多种试剂中NADH可逐渐氧化为NAD+， 随时间延长 AB 有些试剂久置后变混浊而使AB 第*页 （2）试剂空白速率监测 用于连续监测法，设置在加R1后待测物未反应的时间段 某些试剂在检测温度下于检测过程的短时间内 　 发生较为明显的自身分解等，使待测物结果偏高或偏低 　 色素原底物自发分解产生黄色产物，导致结果有正误差 此参数在待测物反应的A变化速率中减去试剂空白速率 　 从而消除或减少这类误差 第*页 2. 酶活性测定准确度的监测 （1）线性检查（linear check） 用于连续监测法 设定非线性度（常采用15%）限值，超出不计算结果 第*页 （2）弹性速率（flexrate） 酶活性太高将导致读数时间内已不呈线性反应或无反应 若某段无反应，选择延迟时间仍呈线性的A值计算结果 使酶活性测定的线性范围得以扩大 第*页 （3）底物消耗限值（substrate exhaust limit） 设置化学反应后A升高(正反应)或下降(负反应)的限值 超过限值说明酶反应底物消耗过多已不足以维持零级反应 该检测结果不准确，仪器会自动减量重做 吸光度限值 第*页 5.样品信息监测　 样品溶血、脂浊、黄疸等会对测定结果产生干扰 按光谱吸收特性，用双波长或多波长检测其性质和程度 在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm 测定样品吸光度比值的大小 6.样品预稀释 设置样品量、稀释剂量和稀释后样品量三个数值 在分析前自动对样品进行高倍稀释 第*页 7. 线性范围和可报告范围 设定了线性范围，则高于上限的会自动减量重做，低于下限则自动增量重做 可报告范围是增量和减量后能测定的范围 8.参考范围　 超过此范围的测定结果，仪器会打印出提示 9. 方法学补偿系数　 用于纠正不同分析方法间测定结果的不一致性 有斜率和截距两个参数 第*页 一、基本操作步骤（一）样品检测的基本过程 所有机械步骤均由微处理器根据已设定程序进行工作 1．取样、加试剂和混匀　 反应盘旋转到一定位置时 　 样品盘转动?→ 样品进入待测位置?→ 样品针吸样到反应杯 反应盘旋转到一定位置时 试剂转盘转动?→所需试剂瓶转到一定位置?→ R针吸取R到反应