医学免疫学课件：标记免疫技术－基本概念.pptVIP

标记免疫技术的分类： 免疫组化技术 总体 免疫测定技术 按是否使用 放射性免疫测定 放射性核素 非放射性免疫测定 按测定反应体 均相免疫测定 固相免疫测定 系的物理状态 非均相免疫测定 液相免疫测定 放射免疫技术 酶免疫技术 按示踪物 荧光免疫技术 化学发光免疫技术 免疫金标记技术 荧光免疫技术是将抗原抗体反应与荧光技术相结合而建立的一种免疫标记技术，具有高度特异性、敏感性和直观性。 荧光免疫技术是最早出现的免疫标记技术。经典的荧光免疫技术是以荧光素标记抗体对抗原进行定位染色，并借助荧光显微镜观察标本片上荧光染色形态，从而判断是否存在待测抗原----荧光抗体技术。然后才进一步发展出荧光免疫分析技术，可对液体中的抗原、抗体进行自动化定量检测。 放射免疫技术始创于1959年Yalow和Berson用放射性核素标记胰岛素，常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。开创了体液微量物质定量分析的崭新领域，并为其他标记免疫分析的建立和发展奠定了基础。 但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足, 放免将逐渐被取代。 20世纪70年代初人们利用酶标记抗体或抗原作为主要试剂，创立了酶免疫分析，其后又衍生出酶免疫组织化学技术，两者统称为酶免疫技术。 分类：液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA） 是目前最为常用的固相酶免疫测定 均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。 非均相免疫测定中的ELISA应用更为广泛，ELISA广泛用于传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、“乙肝二对半”、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等。也用于一些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）。 发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。 化学发光免疫分析技术的类型 化学发光酶免疫分析: 用酶标记抗原或抗体，免疫反应后，酶催化发光底物，引发发光。 （直接）化学发光免疫分析: 化学发光物质直接标记抗原或抗体，免疫反应后引发化学发光。 电化学发光免疫分析： 电化学发光剂标记抗原或抗体，免疫反应后引发电化学发光。 化学发光免疫分析技术的类型 70年代中期，Arakaweu首次报道用发光信号进行酶免分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，将酶免疫分析和化学发光相结合； 1981年Pannagli等建立化学发光免疫分析（CLIA，chemiluminescence immunoassay）； 1984年 Whitehead等首次在发光免疫分析系统中加入荧光素为发光增强剂，极大的提高了CLIA的敏感性； 但当时这种方法也存在明显的不足，如：发光持续时间短，衰减快，仅为数秒，影响因素多，故停留在实验室阶段。  进入90年代中期发展起全自动化学发光免疫分析仪，实现了分析自动化，加上CLIA的敏感性高（可达10-18mol）、快速、几秒钟内产生化学发光信号信息量大，持续时间长、可达数小时，而得到广泛的应用，从而成为非放射免疫分析中最有前途的方法。  免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 生物素-亲和素系统（BAS）是20世纪70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。 生物素-亲和素系统具有高亲和力和多级放大效应，既能偶联抗原（或抗体）分子，又能偶联酶、荧光素等示踪物质，因此可桥联抗原抗体系统和示踪物质指示系统，赋予传统标记免疫分析更高的检测敏感度。 BAS可应用于固相载体的包被环节，以实现某些抗原与固相载体的连接，并可减少抗体的空间位阻。 荧光抗体技术、放射免疫分析和酶