微生物学检验实验：呼吸道致病菌的检测.pptVIP

呼吸道致病菌的检测 一、目的与要求： 1.掌握呼吸道致病菌的检测 2.了解呼吸道标本收集与运送 3.了解呼吸道常见的致病菌 二、试剂 1.平板：血平板、巧克力平板、M-H平板 2.生化鉴定试剂：ⅴ、Ⅹ及ⅴ+Ⅹ因子、奥扑托欣（OP）纸片、胆汁溶菌微量管 三、实验 1.标本的涂片与革兰染色 2.标本的接种与细菌的分离 3.肺炎链球菌的鉴定 4.流感嗜血杆菌的鉴定 四、结果（观察） 肺炎链球菌 嗜血杆菌 X因子是一种对热稳定的血红素及其衍生物(存在于血红蛋白中的一种血红蛋白衍生物），是一种含铁的卟啉，为细菌合成过氧化氢酶、过氧化物酶、细胞色素氧化酶的辅基；V因子是一种对热不稳定的维生素B类物质，存在于血液和某些植物组织中（酵母菌，士豆浸液），是脱氢酶的辅酶，在细胞的呼吸中起递氢的作用。 红细胞中富含X 及V因子，V因子依赖性的嗜血杆菌通常不能在含有完整红细胞的羊血琼脂上生长，因而实验室中常用巧克力琼脂培养基上分离培养嗜血杆菌。 卫星试验原理 有溶血性的细菌在羊血琼脂培养基上生长时可破坏红细胞释放出血红素(即X因子)和维生素B类物质(即V因子)，从而促进了流感嗜血杆菌的生长；金黄色葡萄球菌在生长过程中能合成V因子释放于培养基中，当嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，V因子会促进嗜血杆菌的生长，出现靠近葡萄球菌菌落的嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌菌落的嗜血杆菌菌落较小的现象称为“卫星现象”；在不含血红素琼脂平板上进行的卫星试验，称为“琼脂卫星试验”。 纸片法卫星试验注意事项 A：在脑心琼脂平板上贴X、V和X+V因子纸片时纸片间距离应大于5cm（因为V因子分子量小，扩散距离远），否则会出现X因子假阳性结果。 B：如果出现（X+V）纸片阴性结果，应考虑以下几个问题（1）细菌死亡；（2）培养基营养缺乏；（3）纸片失效。 卡他莫拉菌 乙酰脂酶纸片: 100mg/ml 3-乙酰吲哚丙酮溶液浸泡 纸片后吹干备用 乙酰酯酶试验 用无菌生理盐水将3-乙酰吲哚纸片沾湿，取待检菌落涂在纸片上，3分钟内出现蓝绿色为阳性反应