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基于RAPD分析的李子新品种鉴定 　　摘要：以改进ctab法对玉皇李和未鉴定新品种叶片基因组dna的提取进行了试验。结果表明，该方法从这2个品种李树叶片中均能提出基因组总dna，且dna的纯度和完整性均较好，od260/od280的比值在1.8-2.0之间，无降解现象，pna去除干净;此外，运用rapd标记方法对这2个李品种基因组总dna进行了pcr扩增，其papd分析条带清晰，用20条随机引物共扩增出114条带，平均每条引物扩增出5.7条条带，扩增片段长度为200～2000bp，其中p6、p7、p10、p14和p165条随机引物可以单引物区分这2个品种，共获得20个条带，其中差异条带有6个，表明这6个位点存在差异。因rapd每条扩增谱带对应基因组dna分子上的一个位点，说明供试品种间dna位点存在差异，表明未鉴定新品种在栽培过程中发生突变和分化，可能是1个优良种源。 　　关键词：李;成熟叶片;dna提取;rapd 　　随着分子生物学的发展，分子标记技术以其简单、快捷、实用等优势而成为植物遗传育种领域研究的有力工具之一，rflp（restrictionfragmentlengthpolymor-phism）、rapd（randomamplifiedpolymorphicdna）、aflp（amplifiedfragmentlengthpolymorphism）和ssr（simplesequencerepeats）等多种分子标记技术已广泛应用于多种植物的遗传多样性、亲缘关系、遗传图谱构建及进行分子辅助育种等多方面的研究，而制备高质量的dna是进行分子标记的基础。植物dna的提取方法很多，但如何在这些技术操作过程中获得高质量dna样品是广大生物技术工作者关心的问题。 　　不同植物或同种植物的不同组织具有其各自的特点，其次生代谢产物的种类和含量差异很大，所以很难用一种方法来提取不同植物的dna。果树成熟叶片中多糖、多酚和其他生物质含量较高，提取高质量的基因组dna具有一定的难度，原因是在提取dna过程中多糖及酚类去除不彻底，与dna共沉淀，呈黏稠的胶状物而难以溶解，而且多糖及酚类物质会严重抑制taqdna聚合酶的活性而影响扩增的效果。李属植物（prunusl.）叶片基因组dna的提取已有一些研究，我们最初参照这些方法提取玉皇李和未鉴定新品种叶片基因组dna，但提取的效果均不甚理想。为此，在预备实验的基础上，我们对植物基因组dna提取方法进行了适当改良以满足小批量dna提取的需要，通过rapd扩增获得了适宜于rapd扩增的中国李基因组dna的方法。 　　dna分子标记技术是直接利用植物dna分子水平上的差异来进行鉴别，其结果不受环境和地理因素的影响，更加准确、可靠。目前应用较为广泛的dna分子标记技术是rapd技术。rapd技术是一种使用随机引物快速反映dna多态性的分子标记技术，广泛地应用于遗传多样性、近缘关系、品种鉴别等的研究中。khadivi等应用rapd标记并结合形态学标记对28个伊朗本土甜樱桃和11个国外甜樱桃品种的遗传多样性进行分析，表明品种之间存在着高度的遗传变异。boonpra-kob等用rapd多态性标记分别对加利福尼亚州和美国东南地区的日本李和中国李、欧洲李以及美国本土杂交李品种亲缘关系进行分析。lu等旧用6个rapd引物就区分了18个桃砧木品种，聚类分析结果与以前系谱分析完全吻合，证明ralpd技术能够进行桃品种鉴定。 　　本试验中运用rapd标记方法对2个李品种基因组总dna进行了pcr扩增，其rapd分析条带清晰，用20条随机引物共扩增出114条带，平均每条引物扩增出5.7条条带，扩增片段长度为200～2000bp。20条随机引物中有5条可以单引物区分这2个品种，其中差异条带有6个（表3），表明这6个位点存在差异。这有效地区分这2种品种，因rapd每一条扩增谱带对应基因组dna分子上的一个位点，试验结果说明供试品种间dna位点存在差异，这表明未鉴定新品种在栽培过程中发生突变和分化，可能是1个优良种源。 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　试验李品种为玉皇李和未鉴定新品种。这些品种的叶片采于宁夏吴忠。取秋季老叶，用清水冲洗吸干后置于-80℃冰箱中贮藏备用。 　　2.2完整性检测 　　改进ctab法提取的dna呈无色透明的絮状沉淀，dna样液琼脂糖凝胶电泳分析图谱见图1，从中可以看出2种品种的李子成熟叶片均提出了较完整的基因组dna，无rna污染，也未发生明显降解现象，适合rapd扩增分析。 　　2.3基因组dna的rapd扩增结果 　　为验证提取dna样品进行pcr扩增的适用性，用该法共提取了2个中国李品种