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尼罗罗非鱼的Galectin 8基因的原核表达及条件优化 尼罗罗非鱼的galectin-8基因的原核表达及条件优化 　　摘要：galectin-8属于s型凝集素，是一种内源性凝集素，具有高亲力，含β-半乳糖苷，可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域，均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼galectin-8ncbi上发表的基因序列，利用primer5.0设计1对引物，构建尼罗罗非鱼galectin-8基因的原核表达载体，将重组后的质粒pgex-4t-1-galectin-8导入大肠杆菌中，通过pcr、连接、转化等，进行原核表达。对影响因素进行条件优化，使用优化后的浓度、时间、温度条件表达galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。westernblot检测纯化后的重组蛋白，结果显示，重组蛋白可以很好地结合gst-tag标签的单克隆抗体，实验进一步证明罗非鱼galectin-8的重组蛋白被成功表达，为罗非鱼galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。 　　关键词：尼罗罗非鱼;galectin-8;原核表达;westernblotting;条件优化 　　中图分类号s917.4文献标识码a文章编号1007-7731（2020）05-0006-04 　　prokaryoticexpressionandconditionoptimizationofgalectin-8geneinniletilapia 　　niujimin1etal. 　　（fisheriescollege，guangdongoceanuniversity，zhanjiang524088，china） 　　abstract：galectin-8belongstos-typelectin，anendogenouslectinwithhighaffinityandβ-galactoside，whichareimportantintherecognitionofpathogenicmolecules[1].theproteinhastwofunctionaldomainsthatprovidesimilarconservedsequencestootherproteinsinthefamily[2].primer5.0softwarewasusedtodesignapairofprimersbasedontheniletilapiagalectin-8genesequencepublishedonncbitoconstructtheprokaryoticexpressionvectorofthetilapiagalectin-8gene.therecombinantplasmidiepgex-4t-1-galectin-8wasconstructedandintroducedintoe.coliforprokaryoticexpressionbypcr，ligation，andtransformation.optimalconditionsoffactorsaffectingtheexpressionofgalectin-8recombinantproteinintermsofconcentration，time，andtemperaturewereprovided.thepurifiedrecombinantproteinwasabletospecificallybindtothegst-tagmonoclonalantibodydetectedbywesternblotwhichprovedthesuccessfulexpressionofgalectin-8recombinantproteinoftilapia.thisresultprovidesthefundamentalstothestudyofsubsequentrelatedfunctionsoftilapiagalectin-8. 　　keywords：oreochromisniloticus;galectin-8;prokaryoticexpression;westernblotting;conditionoptimization 　　凝集素（lectins）是脂質复合物上的一种非共价结合蛋白或糖蛋白，可选择识别糖结构[3-4]。半乳糖凝集素（galectin）是凝集素中的1个家族，参与免疫应答过程，在其他方面也发挥着重要作用，可以分为3个亚型：原型[5-6]、嵌合体型和串联重复型[7-11]。 　　galectin-8是1个891bp的开放阅读框（orf），编码296个