桑枝活性成分的提取及其抑菌和抗氧化作用.docxVIP

桑枝活性成分的提取及其抑菌和抗氧化作用 　　摘要：以桑枝作为原料，研究其乙醇提取物的抑菌活性和抗氧化活性。气相色谱-质谱分析结果表明，桑枝乙醇提取物的挥发性组分，主要由酯类（47.76%）、烷烃类（20.27%）、芳香烃类（15.84%）等化合物组成，gc含量最高的化合物是邻苯二甲酸二丁酯（41.20%），gc含量较高的化合物为十一烷（20.27%）。桑枝乙醇提取物的抑菌活性研究结果表明，桑枝乙醇提取物对大肠杆菌（escherichiacoli）具有较好的抑菌活性，抑菌圈直径为（11.77±0.54）mm。桑枝乙醇提取物的抗氧化活性研究結果表明，桑枝乙醇提取物50%dpph自由基清除率质量浓度（ic50）为1.570mg/ml，维生素cic50为0.001mg/ml。桑枝乙醇提取物50%羟基自由基清除率质量浓度（ic50）为68.437mg/ml，维生素cic50为7.082mg/ml。桑枝乙醇提取物对dpph自由基具有较好的清除作用。 　　关键词：桑;气相色谱-质谱;乙醇提取物;抑菌活性;抗氧化活性 　　中图分类号：r284文献标志码：a 　　文章编号：1002-1302（2020）07-0217-04 　　桑（morusalba）为桑科（moraceae）桑属乔木或灌木，东北至西南各省区等均有栽培[1]。桑叶、桑椹为国家卫生部药食同源名录中的品种，桑白皮、桑枝为可用于保健食品名录中的品种[2-5]。桑枝中起主要药理活性作用的成分为桑枝多糖、黄酮类、生物碱类化合物，桑枝黄酮具有很强的抗氧化作用[6-10]。桑枝在食用菌、木醋液等行业领域应用方兴未艾[11-12]。桑种植园每年抚育间伐的桑枝资源丰富，高附加值桑枝的开发利用是桑枝加工利用亟待解决的问题之一。本研究以桑枝作为原料，研究其乙醇提取物的抑菌活性和抗氧化活性，通过气相色谱-质谱（gaschromatography-massspectrometry，简称gc-ms）分析桑枝乙醇提取物的挥发性成分，以期为桑枝的开发利用提供基础数据。 　　1材料与方法 　　1.1试剂与仪器 　　试验用桑枝采自黑龙江省齐齐哈尔市甘南林场的桑产业科技示范园，来源植物为桑科桑属桑的抚育间伐剩余物[13-15]。 　　供试菌种主要有金黄色葡萄球菌（staphylococcusaureus）、大肠杆菌（escherichiacoli）、白色念珠菌（candidaalbicans），由东北林业大学实验室提供。 　　试验主要试剂有二苯基苦基肼自由基（dpph·）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸亚铁、水杨酸、无水乙醇、维生素c，均为分析纯。琼脂，由北京奥博星生物技术有限责任公司提供。 　　试验主要仪器有索氏提取装置（自制）、re-2000a型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）、722型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。 　　1.2试验方法 　　1.2.1桑枝乙醇提取物的制备 　　采用索氏提取装置，溶剂为无水乙醇。桑枝粉碎过筛，取10g桑枝粉末（≤0.425mm），用滤纸包好并用细线扎紧后放入滤筒内，圆底烧瓶中加入100ml无水乙醇，放入水浴锅内，连接好索氏提取装置各部分，接通冷凝水，索氏提取5h，制得桑枝乙醇提取液。温度设为50℃，大气压强为0.1mpa，转速为35r/min，用旋转薄膜蒸发法除去无水乙醇，制得桑枝乙醇提取物。 　　1.2.2桑枝乙醇提取物的gc-ms分析 　　将桑枝乙醇提取物配制成10mg/l的甲醇溶液，利用气相色谱-质谱（gc-ms）联用仪对试样进行分析。色谱分析条件：hp-5ms毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）;fid检测器;初始温度为40℃（保持2min），以10℃/min的升温速率升到280℃（保持2min）;进样口温度为250℃;进样量为1.0μl;不分流，氦气载气，流速为1ml/min。质谱分析条件：ei电离源，接口温度280℃，离子源温度230℃，电子能量70ev，扫描范围30～500u。 　　1.2.3桑枝乙醇提取物的抑菌活性 　　采用滤纸片法测定桑枝乙醇提取物的抑菌活性[16-18]。分别取活化培养的金黄色葡萄球菌（s.aureus）、大肠杆菌（e.coli）、白色念珠菌（c.albicans）置于液体培养基中，在37℃恒温摇床中培养24h，再配制成浓度为106～107cfu/ml的菌悬液，用移液枪吸取已活化好的菌悬液20μl，将其均匀涂抹在冷却后的琼脂平板表面，制成含菌平板。取浸泡过10mg/ml桑枝提取物的干燥6mm圆形滤纸片，贴在上述制好的含菌平板上，每个培养皿（直径为90mm）贴上3片浸过同一种质量